小鼠同线蛋白2(ST2)ELISA试剂盒 新品

产品介绍：

检测原理

试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。预先包被抗体的微孔板中加入标准品和待测样本，温育后加入生物素标记抗体和过氧化物酶标记的链霉亲和素。经过温育和洗涤，结合形成的免疫复合物去除未结合的酶，加入显色底物TMB。TMB在过氧化物酶催化下转化成蓝色，酸作用下转为黄色。颜色深浅与样品中待测因子浓度正相关。最后在450 nm处测定吸光度（OD）值，通过标准曲线计算样本浓度。

检测范围与灵敏度

检测范围：0.156-10 ng/mL。

灵敏度：0.055-0.08 ng/mL。

适用样本

血清、血浆、细胞培养上清液、组织匀浆等。

试剂盒组分

ELISA酶标板

标准品

生物素化抗体

浓缩HRP酶结合物 酶结合物稀释液

生物素化抗体稀释液 标准品&样品稀释液

浓缩洗涤液 底物溶液（TMB）

反应终止液

封板覆膜。

操作步骤

加样：空白孔加入50 μL标准品/样品稀释液，其余孔各加入标准品或待测样品50 μL，混匀后置37℃，40分钟。

洗板：用1×洗涤液充分洗涤4-6次，每孔加入1×洗液350 μL，每次震荡/浸泡1-2分钟，印干。

加生物素化抗体：空白孔加入100 μL生物素化抗体稀释液，其余孔各加入1×的生物素化抗体工作液100 μL，混匀后置37℃，30分钟。

洗板：同上。

加酶结合物：每孔加入SA BC复合物工作液100 μL，混匀后置37℃，20分钟。

洗板：同上。

显色：每孔加入TMB混合液100 μL，混匀后置37℃暗处反应10-20分钟。

终止：每孔加入100 μL终止液，混匀，30分钟内用酶标仪在450 nm处测吸光值。

注意事项

样本处理：避免溶血、细菌污染，冰冻保存避免反复冻融。

试剂准备：浓缩生物素化抗体、浓缩酶结合物使用前需混匀。

洗板：洗涤不充分会导致OD值升高，影响结果准确性。

显色：显色液对光敏感，需避光操作。

结果判读：所有OD值减除空白值后计算，绘制标准曲线，根据样品OD值计算含量。

产品特点

高效灵敏：特异性高，重复性好，板内、板间变异系数均小于10%。

适用广泛：适用于多种样本类型，操作简便。

质量可靠：试剂稳定，结果准确，适用于科研实验。

试剂与样本准备阶段：

温度平衡（最容易被忽视的点）

 操作： 从冰箱取出的试剂盒（包括标准品、酶标试剂、样品等）必须在室温（18-25℃）下平衡 30 分钟。

后果： 冷试剂直接使用会导致孔内温差，产生冷凝水或非特异性背景，严重影响 OD 值。

试剂配制

洗涤液： 浓缩洗涤液如果在低温下保存可能会有结晶析出。配制时必须确保结晶完全溶解并混匀。

现用现配： 酶标试剂和显色液（如 TMB）对光和热敏感，建议在使用前配制工作液，避免失效。

样本处理

避免溶血： 血清样本如果发生溶血（红细胞破裂），会释放过氧化物酶，导致假阳性或背景过高。

离心去杂质： 血液或细胞上清样本在加样前最好进行离心，去除沉淀和悬浮物，防止堵塞孔底或干扰读数。

稀释倍数： 如果样本浓度过高，超出标准曲线范围，必须进行预实验确定稀释倍数。计算结果时记得乘以稀释倍数。

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