小鼠巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α)ELISA试剂盒 新品

产品介绍：

产品概述

名称：小鼠巨噬细胞炎性蛋白1α（MIP-1α/CCL3）ELISA试剂盒

检测方法：双抗体夹心法

规格：48T/96T

检测范围：15.625-1000 pg/ml

灵敏度：9.375 pg/ml

种属反应性：小鼠12345

预包被微孔板：96孔或48孔塑料板，孔内已预先包被捕获抗体。

酶标二抗：辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体。

标准品：已知浓度的MIP-1α系列梯度溶液，用于绘制标准曲线。

样品稀释液：用于稀释样本，减少非特异性干扰。

洗涤缓冲液：含吐温-20的磷酸盐缓冲液，用于洗去未结合物质。

封闭液：牛血清白蛋白或脱脂奶粉溶液，封闭未结合位点。

底物溶液：TMB（四甲基联苯胺），用于显色反应。

终止液：稀硫酸溶液，终止酶促反应。

板封膜：防止蒸发和污染。

说明书：详细的操作步骤、注意事项等。

检测原理

双抗体夹心法：将捕获抗体包被在微孔板上，加入样本或标准品，使MIP-1α与捕获抗体结合。随后加入酶标检测抗体，形成“抗体-MIP-1α-酶标抗体”复合物。加入底物溶液后，酶催化底物显色，颜色深浅与MIP-1α浓度正相关。

适用样本

血清、血浆、细胞培养上清液、细胞裂解液、组织裂解液等。

操作步骤

标准品稀释：按说明书稀释标准品，制备不同浓度梯度。

加样：设空白孔、标准品孔和待测样品孔，加入相应液体。

温育：封板后37℃温育30分钟。

洗涤：弃去液体，用洗涤缓冲液洗涤5次，拍干。

加酶：加入酶标试剂，避光温育。

显色：加入显色剂A、B，避光显色15分钟。

终止：加入终止液，终止反应。

测定：酶标仪450nm波长下测定OD值。

注意事项

试剂盒保存：2-8℃保存，6个月内有效。

样本处理：避免溶血和反复冻融，确保样本清澈透明。

操作规范：使用校准准确的移液器，避免交叉污染。

结果判定：以标准曲线计算样品浓度，注意稀释倍数。

试剂与样本准备阶段：

温度平衡（最容易被忽视的点）

 操作： 从冰箱取出的试剂盒（包括标准品、酶标试剂、样品等）必须在室温（18-25℃）下平衡 30 分钟。

后果： 冷试剂直接使用会导致孔内温差，产生冷凝水或非特异性背景，严重影响 OD 值。

试剂配制

洗涤液： 浓缩洗涤液如果在低温下保存可能会有结晶析出。配制时必须确保结晶完全溶解并混匀。

现用现配： 酶标试剂和显色液（如 TMB）对光和热敏感，建议在使用前配制工作液，避免失效。

样本处理

避免溶血： 血清样本如果发生溶血（红细胞破裂），会释放过氧化物酶，导致假阳性或背景过高。

离心去杂质： 血液或细胞上清样本在加样前最好进行离心，去除沉淀和悬浮物，防止堵塞孔底或干扰读数。

稀释倍数： 如果样本浓度过高，超出标准曲线范围，必须进行预实验确定稀释倍数。计算结果时记得乘以稀释倍数。

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