小鼠胶质细胞系来源的神经营养因子(GDNF)ELISA试剂盒 新品

小鼠胶质细胞系来源的神经营养因子(GDNF)ELISA试剂盒

产品简介:

原理

采用双抗体夹心ABC-ELISA法。酶标板预先包被抗小鼠GDNF单抗，标准品和样本中的GDNF与之结合。加入生物素化的抗小鼠GDNF抗体，形成免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲和素，与生物素结合。加入底物溶液后，酶催化底物显色，通过酶标仪测定吸光度，绘制标准曲线，计算样本中GDNF的浓度。

检测范围与灵敏度

检测范围：通常为4.688-300pg/ml。

灵敏度：可达2.813pg/ml。

试剂盒组成

预包被抗GDNF抗体的酶标板。

标准品（冻干粉，需用稀释液复溶）。

生物素标记的检测抗体。

HRP标记的链霉亲和素。

底物溶液（TMB等）。

洗涤液和终止液。

封板膜等其他辅助试剂。

样本类型

适用于血清、血浆、细胞培养上清液、细胞裂解液、组织匀浆液等多种样本类型。

操作步骤

样本处理：血清/血浆离心取上清；组织匀浆后离心取上清，避免反复冻融。

标准品配制：按说明书梯度稀释标准品。

加样：加入样本或标准品，设空白孔，温育后洗涤。

检测抗体孵育：加入生物素化抗体，温育后洗涤。

显色反应：加入HRP标记的酶结合物，温育后洗涤，加底物显色。

终止反应与读数：加入终止液，用酶标仪测定OD值。

注意事项

试剂盒需从冷藏环境中取出后平衡至室温再使用。

避免交叉污染，加样时更换枪头。

洗涤步骤需彻底，避免残留影响信号。

标准品和试剂需恢复至室温后再使用。

终止液具有腐蚀性，操作时需戴手套。

若OD值超出标准曲线范围，需调整样本稀释比例。

优势

高效灵敏：特异性抗体确保高灵敏度和特异性。

稳定可靠：优化的实验步骤和试剂，保证结果的重复性和可靠性。

操作简便：适用于多种样本类型，操作步骤标准化。

如何验证试剂盒的特异性？（实操建议）：

稀释线性实验 (Linearity)：

操作： 将高浓度的阳性样本用稀释液进行梯度稀释（如1:2, 1:4, 1:8...）。

预期： 测得的浓度值与稀释倍数应呈良好的线性关系（相关系数 R² ≥ 0.98）。如果线性不好，说明样本基质中有干扰物影响了特异性结合。

干扰实验 (Interference Test)：

操作： 在已知浓度的目标抗原溶液中，加入高浓度的潜在干扰物（如高浓度的脂质或结构类似物），检测其对结果的影响。

预期： 若检测值与理论值偏差在±10%以内，说明抗干扰能力强，特异性好。

回收实验 (Recovery Test)：

操作： 在样本中加入已知量的标准品，检测总含量，计算回收率。

预期： 回收率在80%-120%之间，说明试剂盒能准确识别目标，不受样本背景干扰。

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注意事项

科研用途：仅供科研实验使用，不可用于临床诊断。

操作规范：严格按照说明书操作，避免交叉污染，确保实验结果准确。