小鼠胶质细胞系来源的神经营养因子(GDNF)ELISA试剂盒

实验原理

双抗体夹心法：

① 包被抗GDNF抗体 → ② 加入样本/标准品 → ③ 加入酶标抗体 → ④ TMB显色 → ⑤ 酶标仪（450nm）读值。

颜色深度与GDNF浓度正相关。

试剂盒组分

| 组分 | 96T配置 | 48T配置 | 状态 |

| GDNF标准品 (500ng/ml) | 0.5ml | 0.5ml | 稀释即用 |

| 预包被酶标板 | 1块（12孔×8）| 1块（12孔×4）| 即用型 |

| 生物素标记抗体 | 2ml | 2ml | 即用型 |

| 链霉亲和素-HRP | 6ml | 3ml | 即用型 |

| TMB显色液（A/B） | 各6ml/3ml | 各3ml/1.5ml | 避光保存 |

| 终止液 | 6ml | 3ml | 即用型 |

需自备设备

酶标仪（450nm主波长，570nm/630nm校正波长）

移液器、恒温培养箱

样本处理要求

| 样本类型 | 处理步骤 |

| 血清 | 全血室温静置2小时后，1000g离心20分钟，取上清 |

| 血浆 | 抗凝全血（EDTA/肝素），采集后30分钟内1000g离心20分钟 |

| 组织匀浆 | 组织用PBS匀浆后，2000-3000转/分离心20分钟 |

| 细胞上清 | 直接1000g离心20分钟，取上清 |

注意：

避免溶血或反复冻融（-20℃保存需分装）；

浑浊样本需再次离心后检测。

操作步骤（25℃室温平衡20分钟后操作）

标准品稀释：

冻干粉用1mL样本稀释液溶解（10000 pg/mL）；

梯度稀释：5000 pg/mL、2500 pg/mL → 至156 pg/mL（共7个浓度）。

加样与温育：

标准品/样本孔：加50μL → 空白孔：不加样；

检测抗体：每孔加100μL（空白孔除外）；

封板膜覆盖，37℃孵育60分钟；

洗涤：

手工洗板：倒掉液体，注满1×洗涤缓冲液（20×浓缩液1:20稀释），静置30秒后弃去，重复5次；

显色与终止：

每孔加TMB底物100μL，避光室温（25℃）反应10分钟；

加终止液50μL，颜色由蓝转黄后30分钟内读板（450nm波长）。

结果计算

以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线（推荐四参数回归法）；

样本浓度 = 标准曲线拟合值 × 稀释倍数。

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