猪布鲁氏杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒

猪布鲁氏杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

检验原理

本试剂盒基于SYBR Green染料法实时荧光PCR技术，针对猪布鲁氏杆菌基因组高度保守区域设计特异性引物，通过荧光信号实时监测核酸扩增过程，实现定性及定量分析。扩增过程中，荧光信号强度与目标核酸含量成正比，通过标准曲线计算样本中猪布鲁氏杆菌的拷贝数。

试剂组成

扩增预混液：含DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液及SYBR Green染料（500μL/管，避光保存）。

特异性引物混合液：猪布鲁氏杆菌靶基因引物（100μL/管）。

阳性对照：1×10^8 拷贝/μL的猪布鲁氏杆菌DNA片段（50μL/管）。

模板稀释液：无核酸酶水（1mL/管，用于标准曲线制备）。

使用手册：含操作流程及数据分析方法。

性能特点

高特异性：引物针对猪布鲁氏杆菌保守序列设计，与其他病原体无交叉反应。

高灵敏度：最低检测限可达100拷贝/反应。

闭管操作：减少气溶胶污染风险。

即用型：预混反应液简化操作步骤，仅需加入模板DNA。

适用范围

科研用途：适用于猪布鲁氏杆菌核酸的实验室检测，不可用于临床诊断。

储存与运输

储存条件：-20℃避光保存，有效期12个月。

运输方式：低温干冰运输。

自备试剂与仪器

仪器：支持SYBR Green通道的实时荧光定量PCR仪。

耗材：PCR管、离心管、带滤芯枪头等。

操作步骤

样本处理：提取待测样本DNA（建议浓度≥10ng/μL）。

阳性对照稀释：按10倍梯度稀释阳性对照（10^2–10^7 拷贝/μL），用于标准曲线绘制。

反应体系配制（20μL/反应）：

预混液10μL + 引物混合液2μL + 模板DNA2μL + 超纯水6μL。

PCR程序设置：

预变性：95℃ 5分钟；

扩增：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（40循环，采集荧光信号）。

数据分析：根据Ct值及标准曲线计算样本中目标核酸含量。

注意事项

实验分区操作（试剂配制区、样本处理区、扩增区），避免交叉污染。

阳性对照需独立稀释，严禁直接使用高浓度原液。

反应液避光保存，避免反复冻融。

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