人多肽YY(PYY)ELISA试剂盒

人多肽YY(PYY)ELISA试剂盒

实验原理:

试剂盒采用双抗体夹心法。用抗人PYY的捕获抗体包被微孔板，加入标准品或样本后，PYY与包被抗体结合。随后加入生物素标记的检测抗体，形成“固相抗体-PYY-生物素抗体”复合物。再加入链霉亲和素-过氧化物酶（HRP）结合物，形成免疫复合物。加入底物TMB后显色，颜色深浅与PYY浓度正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样本中PYY的浓度。

检测范围与灵敏度

检测范围：不同试剂盒的检测范围略有差异，通常在1.563～100pg/mL或62.5-2000 pg/mL。

灵敏度：一般为0.938pg/mL或更低。

试剂盒组成

预包被抗体的微孔板：用于固定抗体。

标准品：用于绘制标准曲线。

生物素标记的检测抗体：与PYY结合。

链霉亲和素-HRP结合物：催化底物显色。

底物溶液：TMB，用于显色反应。

终止液：终止显色反应。

洗涤液：用于洗涤未结合的成分。

操作步骤

加样：在微孔板中加入标准品或样本。

温育：与包被抗体结合。

洗涤：去除未结合的成分。

加检测抗体：加入生物素标记的检测抗体，温育后洗涤。

加酶标结合物：加入链霉亲和素-HRP结合物，温育后洗涤。

显色：加入底物溶液，温育显色。

终止：加入终止液，终止反应。

测定：用酶标仪测定OD值。

应用

科研用途：研究PYY在肥胖、糖尿病等代谢性疾病中的作用。

临床研究：辅助诊断与PYY水平异常相关的疾病。

注意事项

样本处理：避免溶血和反复冻融。

试剂保存：按说明书保存，避免反复解冻。

实验操作：使用一次性吸头，避免交叉污染。

公司正在出售的产品：

稀释线性实验 (Linearity)：

操作： 将高浓度的阳性样本用稀释液进行梯度稀释（如1:2, 1:4, 1:8...）。

预期： 测得的浓度值与稀释倍数应呈良好的线性关系（相关系数 R² ≥ 0.98）。如果线性不好，说明样本基质中有干扰物影响了特异性结合。

干扰实验 (Interference Test)：

操作： 在已知浓度的目标抗原溶液中，加入高浓度的潜在干扰物（如高浓度的脂质或结构类似物），检测其对结果的影响。

预期： 若检测值与理论值偏差在±10%以内，说明抗干扰能力强，特异性好。

回收实验 (Recovery Test)：

操作： 在样本中加入已知量的标准品，检测总含量，计算回收率。

预期： 回收率在80%-120%之间，说明试剂盒能准确识别目标，不受样本背景干扰。