人半乳糖凝集素9(GAL9)ELISA试剂盒 新品

一、技术原理与创新特性：

高特异性检测系统：

双表位识别技术：采用抗人GAL-9 N端CRD单抗（克隆9M1-3）作为捕获抗体，结合C端CRD特异性检测抗体（克隆1G3）

糖基化形式检测：通过特殊缓冲体系可区分不同糖基化修饰的GAL-9亚型

抗干扰设计：添加乳糖类似物（TDG）阻断内源性半乳糖苷结合活性

2025年技术升级：

新增Tim-3结合活性检测功能

标准品溯源至JCRB细胞库（JCRB1317）

微孔板采用仿生糖链修饰表面（批间差<3%）

试剂盒配置与关键参数

标准组件清单：

预包被96孔板（12条×8孔独立包装，充氩气保存）

重组人GAL-9标准品（7梯度：0.05-100 ng/mL，含NIST证书）

检测系统：

纳米金标记二抗（4℃避光稳定12个月）

增强型TMB底物（灵敏度提升8倍）

专用组织裂解液（含β-巯基乙醇）

性能指标：

参数  规格  生物学意义

检测范围  0.05-100 ng/mL  覆盖胞内外浓度

灵敏度  0.02 ng/mL  可检测免疫突触释放

精密度  板内CV<4%，板间CV<7%  满足GLP要求

特异性  与GAL-1/3交叉反应<0.1%  确保检测准确性

实验操作标准化流程

样本处理关键点：

血清/血浆：推荐使用肝素抗凝（优于EDTA）

稳定性数据：

4℃保存≤72小时（需添加蛋白酶抑制剂）

-80℃可保存2年（避免反复冻融）

特殊样本：

肿瘤组织需液氮速冻

细胞上清需离心去除外泌体

优化操作步骤：

样本预处理：含10mM DTT的PBS还原二硫键

加样策略：采用棋盘式加样顺序

关键孵育：37℃微孔板振荡器（600rpm）90分钟

信号读取：双波长检测（450nm/570nm）

临床应用与科研价值

疾病诊断阈值：

肝癌筛查：血清>25 ng/mL联合AFP提高早期诊断率

HIV感染：血浆水平>15 ng/mL预示免疫重建不良

移植排斥：尿GAL-9>10 ng/mL早于肌酐升高

2025年研究突破：

发现GAL-9-Tim-3轴调控Treg/Th17平衡新机制

重组GAL-9（rGAL-9）治疗自身免疫病进入II期临床

空间转录组揭示肿瘤免疫微环境GAL-9梯度分布

质量控制与问题处理

质控标准：

标准曲线要求：4参数拟合R2≥0.995

必检参数：

空白OD值<0.1

质控品回收率90-110%

故障排除指南：

异常现象  可能原因  解决方案

前带效应  抗原过量  进行1:10-1:100稀释

信号波动  温度不均  使用带PID控制的孵育箱

背景升高  板条污染  更换新批次板条

公司正在出售的产品：

常见问题与避坑指南：

环节   风险点   避坑建议

试剂使用   混用   严禁混用不同品牌或不同批号的试剂盒组分（如A品牌的包被板+B品牌的酶标二抗），这会导致反应体系崩溃。

终止反应   顺序   加入终止液后，溶液由蓝变黄。此时应尽快读数，因为颜色可能会随时间轻微变化。

保存   剩余板条   未用完的酶标板条，需立即密封，放入自封袋中并加干燥剂，保存于 2-8℃，避免受潮和反复冻融。

环境   污染   避免试剂接触漂白剂或含漂白剂的物质，它们会破坏酶的活性，导致实验失败。

建议： 

在购买前，务必查看说明书中的“交叉反应”列表和“样本类型”说明。如果说明书宣称特异性极高（如CR0.1%），

但在你的实际样本中出现了大量假阳性，那可能需要优化洗涤步骤，或者考虑更换抗体特异性更强的试剂盒。