人葡萄膜黑色素瘤；92-1[Human uveal melanoma] (STR) 新品

人葡萄膜黑色素瘤；92-1[Human uveal melanoma] (STR)

商品属性

核心背景信息

来源：1980年代从一名76岁女性右眼眶原发性葡萄膜黑色素瘤组织分离建立，保藏编号ECACC 13012458

分子特征：

染色体核型：近三倍体（模式数64-68），携带GNAQ Q209L突变（葡萄膜黑色素瘤高频驱动突变）

标志物：表达黑色素细胞标志物MITF、TYR（酪氨酸酶），不表达角蛋白（排除上皮来源）

形态特性 多角形，贴壁生长

培养体系

基础培养基：RPMI 1640（含20 mM Hepes）

添加成分：10%胎牛血清（FBS）

推荐传代比例：1:2至1:3（视密度调整）

换液频率：每2-3天更换一次培养基

冻存条件

冻存液配方：基础培养基 + 5% DMSO + 20% FBS

保存温度：液氮长期储存（-196℃）

传代步骤

弃去旧培养基，用PBS（无钙镁）轻柔润洗细胞1-2次。

加入0.25%胰酶消化液（1-2 mL/瓶），37℃孵育至细胞脱落。

加入含血清培养基终止消化，离心（1000 rpm, 5分钟）后重悬。

按比例接种至新培养瓶，补充新鲜培养基。

细胞复苏要点

快速解冻（37℃水浴），转移至含8 mL预热培养基的离心管中离心。

弃上清，重悬后接种至培养瓶，静置培养24小时后再换液。

关键注意事项

1. 细胞状态判断技巧

健康状态：胞质均匀，折光性强，无大量黑色颗粒（黑色素小体是正常现象）

异常信号：若出现空泡化（密集培养时偶见），可降低接种密度至1×10⁴ cells/cm²

2. 实验干扰因素排除

血清批次筛选：选择低内毒素FBS（<10EU/mL），避免非特异性激活NF-κB通路

传代代数控制：建议使用P10-P30代细胞（代数过高易丢失GNAQ突变）

3. 特殊实验建议

研究黑色素合成时，可在培养基中添加200μM IBMX（磷酸二酯酶抑制剂），48小时后黑色素含量增加2倍

进行基因编辑时，推荐电转染（Lipofectamine转染效率仅20%-30%）
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