酰基转移酶(AAT)测定试剂盒/微量法/96样

酰基转移酶(AAT)测定试剂盒/微量法/96样

测定意义：

AAT 是一个多功能蛋白大家族，主要负责催化生物体内各种酰基化和去酰基化反应，在基因表达、代谢和信号传导中具有重要作用。

测定原理：

AAT 催化乙酰 CoA 转移乙酰基到丁醇，释放的 CoA 还原 DTNB 生成 TNB ；TNB 在 412nm 有吸收峰，测定 412 nm 吸光度增加速率可计算 AAT 活性。

自备仪器和用品：

研钵、冰、台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、恒温水浴锅、无水乙醇。

AAT 测定操作：
1、分光光度计/酶标仪预热30min ，调节波长到 412 nm，蒸馏水调零。

2、工作液的配制：临用前在试剂二瓶中加入 18mL 试剂一，充分混匀待用。用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

3、试剂三的配制：临用前加无水乙醇 1mL 充分溶解待用，用不完的试剂 4℃保存。

4、空白管：在 Ep 管或 96 孔板中加入 10μL 提取液和 180μL 工作液，充分混匀，35℃反应 15min，加入 10μL试剂三，充分混匀，25℃静置 10min ，测定 412nm 处吸光值，记为 A 空白管。

5、测定管：在 Ep 管或 96 孔板中加入 10μL 样本和 180μL 工作液，充分混匀，35℃反应 15min，加入 10μL试剂三，充分混匀，25℃静置 10min ，测定 412nm 处吸光值，记为 A 测定管。△A=A 测定管- A 空白管，空白管只要做一管。

注 意：

正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。