丙酮酸磷酸双激酶(PPDK)测定试剂盒/分光光度法/48样

丙酮酸磷酸双激酶(PPDK)测定试剂盒/分光光度法/48样

测定意义：

丙酮酸磷酸双激酶（pyruvate phosphate dikinase, PPDK, EC 2.7.9.1 ）是 C4 途径和景天科酸代谢途径的限速酶，催化 ATP、丙酮酸和 Pi 经三步反应生成磷酸烯醇式丙酮酸。该酶主要存在于 C4 植物的叶绿体基质中，对光合功能具有重要调节作用。

测定原理：

PPDK 的逆向反应催化磷酸烯醇式丙酮酸、AMP 和 PPi 生成丙酮酸、ATP 和 Pi ，乳酸脱氢酶进一步催化丙酮酸和 NADH 生成乳酸和 NAD+ ，在 340nm 测定 NADH 减少速率，计算 PPDK 活性。

自备仪器和用品：

紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

测定步骤和加样表：

1 、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。

2 、 样本测定

（1）工作液的配制：临用前取试剂二一瓶加入 25mL 试剂一和 12.5μL 试剂三，充分混匀，置于 37℃水浴5min；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

（2）在 1mL 石英比色皿中加入 50μL 样本和 950μL 工作液，混匀，立即记录 340nm 处初始吸光值 A1 和 37 ℃反应 5min 后的吸光值 A2 ，计算 ΔA=A1-A2。

注 意：

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。