乙酸激酶(ACK)测定试剂盒/分光光度法/48样

乙酸激酶(ACK)测定试剂盒/分光光度法/48样

测定意义：

ACK 主要存在于微生物中，催化乙酸和 ATP 生成乙酰磷酸和 ADP ，是细菌碳代谢和能量代谢的关键酶，尤其是在古细菌甲烷合成代谢中起着中枢作用。

测定原理：

（1）ACK 催化乙酸钠和 ATP 生成乙酰磷酸和 ADP ，（2）丙酮酸激酶催化 ADP 和 PEP 生成 ATP 和丙酮酸， （3）乳酸脱氢酶催化丙酮酸和 NADH 生成乳酸和 NAD+ ，（4）在 340nm 下测定 NADH 氧化生成 NAD+速率，即可反映 ACK 活性。

自备仪器和用品：

紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

测定步骤：

1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。

2、 样本测定

（1）工作液的配置：临用前取试剂二一瓶，加入 25mL 试剂一和500μL 试剂三，充分混合溶解，置于 37 ℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 5min；现配现用；

（2）在 1mL 石英比色皿中加入 100μL 样本和 900 μL 工作液，混匀，立即记录 340nm 处 20s 时的吸光值A1 和 3min20s 后的吸光值 A2 ，计算 ΔA=A1-A2。

注 意：

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。