甲基柠檬酸合酶(MCS)测定试剂盒/微量法/96样

甲基柠檬酸合酶(MCS)测定试剂盒/微量法/96样

测定意义：

MCS 广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体基质中，与柠檬酸合酶（CS）共同参与三羧酸循环的调节。

测定原理：

MCS 催化丙酰 CoA 和草酰乙酸产生甲基柠檬酰辅酶 A，进一步水解产生甲基柠檬酸；该反应促使无色的DTNB 转变成黄色的 TNB，在 412nm 处有特征吸光值。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰、无水乙醇和蒸馏水。

测定步骤：
11 、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 412nm，蒸馏水调零。

2、样本测定

（1）在试剂五中加入 1mL 无水乙醇和 22mL 试剂四，混匀，37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）孵育5min；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；

（2）在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 样本、220μL 试剂五和 10μL 试剂六，混匀，记录 412nm处 20 秒时的初始吸光度 A1 和 2 分 20 秒时的吸光度 A2 ，计算 ΔA=A2-A1。

分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 412nm，蒸馏水调零。

2、样本测定

(1) 在试剂五中加入 1mL 无水乙醇和 22mL 试剂四，混匀，37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）孵育5min；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；

(2) 在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 样本、220μL 试剂五和 10μL 试剂六，混匀，记录 412nm处 20 秒时的初始吸光度 A1 和 2 分 20 秒时的吸光度 A2 ，计算 ΔA=A2-A1。

注 意：

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。