H5N6 亚型禽流感病毒检测试剂盒

该试剂盒通常采用 TaqMan 荧光探针法 或 双色实时荧光 PCR 法。

检测靶标：针对 H5N6 病毒基因组中的高度保守区域设计特异性引物和探针。

双重检测：为了提高准确性，许多试剂盒设计为双重反应，即同时检测 H5 基因和 N6 基因。

FAM 通道：检测 H5 亚型特异性基因。

VIC/HEX 通道：检测 N6 亚型特异性基因。

内标系统：部分试剂盒会加入内源性内标（如管家基因），用于监测试剂盒是否失效以及样本中是否存在 PCR 抑制物，防止假阴性。

 2. 试剂盒组成

以常见的 50 测试/盒规格为例主要包含以下组分：

组分名称 描述 保存条件

PCR 反应液 含 dNTPs、Mg2、缓冲液 -20℃ 避光保存

酶液 (Taq/RT-Enzyme) 热启动 Taq 酶或逆转录酶 -20℃ 保存

引物/探针混合液 特异性识别 H5N6 保守序列 -20℃ 避光保存

阳性质控品 含 H5N6 目标片段的质粒或灭活病毒 -20℃ 保存

阴性质控品 无菌生理盐水或缓冲液 4℃ 或 -20℃ 保存

 3. 适用范围与背景

检测对象：主要针对甲型流感病毒 H5N6 亚型。

应用领域：动物疫病监测（如活禽市场、养殖场）、出入境检验检疫、科研实验、临床呼吸道感染辅助诊断。

检测样本：咽拭子、鼻拭子、泄殖腔拭子、禽肉/内脏组织匀浆、环境样本（如粪便、水）。

灵敏度：通常最低检测限可达 1×103 拷贝/mL，能检出极低浓度的病毒。

 4. 操作流程简述

样本前处理：

核酸提取：使用病毒 DNA/RNA 提取试剂盒从样本中提取核酸。

体系配置：

在冰上将反应液、酶液、引物探针混合。

分装至 PCR 管中，加入提取好的核酸模板。

上机扩增：

程序设置：

逆转录（仅限一步法 RT-PCR）：42℃-50℃

预变性：95℃ 5 min

扩增循环 (40-45 cycles)：95℃ 15 sec → 60℃ 30-60 sec (收集荧光)

结果判读：

阳性：FAM 和 VIC 通道均出现典型的 S 型扩增曲线，且 Ct 值 ≤ 35-40（具体阈值视说明书而定）。

阴性：无扩增曲线，或 Ct 值 > 40。

无效：阳性对照未扩增或阴性对照出现扩增。

 5. 关键注意事项

严格防污染：

PCR 检测对污染极其敏感，实验室必须严格分区（试剂准备区、样本制备区、扩增区），严禁物品交叉使用。

严禁在扩增区打开扩增后的 PCR 管盖。

储存与运输：

试剂盒通常需要 -20℃ 避光保存。

避免反复冻融：反复冻融次数通常限制在 3-5 次以内，否则会影响酶活性。

生物安全：

处理禽类组织或泄殖腔拭子时，需在生物安全柜中操作，防止气溶胶吸入。

 总结

该试剂盒是目前 H5N6 禽流感病毒检测的“金标准”。如果你是在科研机构或兽医实验室工作，建议优先选择荧光 PCR 法试剂盒以获得最准确的定量结果。如果你需要在现场进行快速排查，也可以关注市面上的RT-LAMP 法或胶体金法试剂盒，但灵敏度会相对较低。