病毒DNA/RNA提取试剂盒（吸附柱法）

病毒DNA/RNA提取试剂盒（吸附柱法）

一、产品核心功能：

适用范围：

样本类型：血清、血浆、咽拭子、粪便、细胞培养上清、环境样本（水体/表面拭子）。

病毒类型：兼容DNA病毒（如腺病毒、疱疹病毒）和RNA病毒（如流感病毒、SARS-CoV-2）。

提取目标：高效分离高纯度病毒核酸（DNA/RNA），适用于qPCR、测序、基因分型等下游实验。

二、技术原理与流程

裂解阶段：

裂解液含 离液盐（异硫氰酸胍） 和 去污剂，破坏病毒衣壳释放核酸，同时抑制核酸酶活性。

结合阶段：

在高盐条件下，核酸通过氢键和静电作用特异性结合硅胶膜吸附柱。

洗涤阶段：

Buffer RW1：去除蛋白质和脂类。

Buffer RW2（含乙醇）：去除盐分和小分子杂质。

洗脱阶段：

低盐缓冲液（无核酸酶水或TE）洗脱，获得纯净核酸（DNA/RNA可同步提取）。

三、关键性能参数

指标 DNA参数 RNA参数

得率 ≥90%（10^6病毒颗粒） ≥85%（10^6病毒颗粒）

纯度（A260/A280） 1.7-2.0 1.8-2.1

灵敏度 ≤50 copies/反应 ≤50 copies/反应

处理时间 20分钟/样本 25分钟/样本（含DNase处理）

四、注意事项与优化策略

样本处理：

复杂样本（如粪便）：需预离心或蛋白酶K消化（56℃ 15分钟）。

液体样本：体积不超过吸附柱结合容量（通常≤200 μL）。

抑制物控制：

血液样本中血红素或粪便多糖可能抑制PCR，建议：

加入 载体RNA（如poly-A）提高低载量样本回收率。

洗脱前用 DNase/RNase-Free柱 空离去除残留乙醇。

质量控制：

每批次设置：

阴性对照（无核酸水）监控污染。

阳性对照（已知浓度病毒核酸）验证效率。

五、常见问题解答

Q：能否区分宿主与病毒核酸？

A：可通过 DNase I处理（提取RNA时）或 选择性裂解（如Triton X-100裂解宿主细胞）。

Q：与磁珠法相比的优劣？

吸附柱法：成本低、操作简单，适合小通量；

磁珠法：自动化程度高，适合高通量（96孔板），但需专用设备。

Q：洗脱体积如何选择？

常规：30-50 μL（平衡浓度与得率）；低载量样本可减至20 μL以提高浓度。

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