小鼠OPN-Osteopontinelisa试剂盒 新品

产品介绍：

小鼠OPN（Osteopontin，骨桥蛋白）ELISA试剂盒是一种用于定量检测小鼠血清、血浆、组织匀浆及细胞培养上清等样本中OPN蛋白浓度的科研工具。该试剂盒基于双抗体夹心ELISA原理，具有高灵敏度和特异性，能够准确测量OPN含量，广泛应用于骨代谢、免疫调节、炎症、肿瘤等领域的研究。

主要特点

检测原理：采用双抗体夹心法，预包被抗小鼠OPN特异性抗体，样本中的OPN与抗体结合后，加入酶标二抗，形成免疫复合物。加入TMB显色底物后，颜色深浅与OPN浓度成正比，通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度，样本浓度与OD值成正相关。

灵敏度：最低检测限可达0.05 pg/mL ～ 4 pg/mL，检测范围常见为15 pg/mL ～ 1000 pg/mL（不同品牌有所差异）。

样本类型：适用于血清、血浆（EDTA/肝素抗凝）、细胞上清、组织匀浆等，需避免反复冻融和3防腐剂。

试剂盒规格与保存：常见为48T或96T，2-8℃保存，标准品建议-20℃保存，避免潮湿和阳光直射。

特异性：仅识别小鼠OPN（SPP1），与其他细胞因子或骨代谢相关蛋白无明显交叉反应。

精密度：板内和板间变异系数均低于10%，重复性好。

典型操作流程

标准品与样本加样：设标准孔和样本孔，按说明书梯度稀释标准品和待测样本。

温育反应：37℃孵育30-60分钟。

洗涤：用洗涤液洗板4-6次，拍干。

加酶标抗体：每孔加入酶标二抗，37℃孵育30分钟。

显色与终止：加入显色液，避光显色10-15分钟，加终止液后立即读数。

结果计算：根据标准曲线计算样本中OPN浓度。

注意事项

样本需新鲜采集并尽快检测，避免反复冻融

试剂使用前需平衡至室温，充分混匀

洗涤过程需规范，避免交叉污染

不同批号试剂勿混用

仅限科研使用，不可用于临床诊断或人体实验

废弃物应按生物危害物处理

主要优点缺点

维度  优势 (Pros) 劣势 (Cons)

检测性能   灵敏度极高，特异性强，结果准确  可能存在交叉反应，易受干扰物影响

操作体验   流程标准化，无需昂贵设备，适合高通量检测   步骤多且繁琐，耗时较长，对操作技巧有要求

经济成本   适合大批量样本检测，长期看性价比尚可   单次试剂成本较高，且不同批次可能存在差异

应用范围   可检测血清、血浆、细胞上清等多种样本   对样本质量（如是否溶血）敏感

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试剂与样本准备阶段

温度平衡（最容易被忽视的点）

 操作： 从冰箱取出的试剂盒（包括标准品、酶标试剂、样品等）必须在室温（18-25℃）下平衡 30 分钟。

后果： 冷试剂直接使用会导致孔内温差，产生冷凝水或非特异性背景，严重影响 OD 值。

试剂配制

洗涤液： 浓缩洗涤液如果在低温下保存可能会有结晶析出。配制时必须确保结晶完全溶解并混匀。

现用现配： 酶标试剂和显色液（如 TMB）对光和热敏感，建议在使用前配制工作液，避免失效。

样本处理

避免溶血： 血清样本如果发生溶血（红细胞破裂），会释放过氧化物酶，导致假阳性或背景过高。

离心去杂质： 血液或细胞上清样本在加样前最好进行离心，去除沉淀和悬浮物，防止堵塞孔底或干扰读数。

稀释倍数： 如果样本浓度过高，超出标准曲线范围，必须进行预实验确定稀释倍数。计算结果时记得乘以稀释倍数。