大鼠OPN-Osteopontinelisa试剂盒

                                             大鼠OPN-Osteopontinelisa试剂盒
概述

本试剂盒采用 双抗体夹心ELISA法，可高灵敏度、高特异性地定量检测大鼠 血清、血浆、细胞培养上清、骨组织匀浆、尿液 等样本中的 OPN 含量。

检测原理

双抗体夹心ELISA：

预包被抗体：微孔板包被抗大鼠OPN单克隆抗体。

样本结合：样本中的OPN与包被抗体结合。

检测抗体：加入生物素或HRP标记的二抗，形成“抗体-抗原-酶标抗体”复合物。

显色反应：加入TMB底物，HRP催化显色（蓝色→黄色）。

终止检测：加入终止液（硫酸或磷酸），450 nm测OD值，计算浓度。

试剂盒组成

组分  说明

预包被96孔板  抗大鼠OPN抗体包被

标准品（0-100 ng/mL）  重组大鼠OPN（冻干或液体）

检测抗体  生物素/HRP标记抗大鼠OPN抗体

TMB显色液  HRP底物（3,3',5,5'-四甲基联苯胺）

终止液  1M/2M硫酸或磷酸

洗涤缓冲液（10×或20×）  PBS-Tween 20

样本稀释液  适用于血清/血浆/组织匀浆

检测范围 & 灵敏度

检测范围：0.156–100 ng/mL（不同品牌可能略有差异）。

最低检测限（灵敏度）：<0.1 ng/mL。

特异性：仅检测大鼠OPN，不与其他SIBLING蛋白（如BSP、DMP1）交叉反应。

重复性：板内CV <8%，板间CV <10%。

 样本要求

样本类型  处理建议

血清/血浆  离心（3000 rpm, 10 min）去除杂质

骨组织匀浆  液氮研磨后裂解，离心（10000×g, 10 min）取上清

尿液  离心（2000 rpm, 5 min）去除沉淀

细胞培养上清  直接检测或适当稀释

储存条件：短期（24h）可4℃保存，长期需-20℃或-80℃冻存，避免反复冻融。

实验流程（简要步骤）

标准品稀释：梯度稀释（0、0.156、0.312、0.625、1.25、2.5、5、10、20、50、100 ng/mL）。

加样：标准品、样本各100 μL/孔，37℃孵育1-2小时。

洗涤：洗板3-5次（300 μL/孔洗涤液）。

加检测抗体：100 μL/孔，37℃孵育1小时。

加酶标二抗（如适用）：HRP-Streptavidin（若使用生物素系统）。

显色：加TMB 100 μL/孔，避光反应15-30分钟。

终止：加终止液50 μL/孔。

检测：450 nm测OD值（参考波长630 nm）。

6. 应用领域

骨代谢研究：骨质疏松、骨折愈合中的OPN表达调控。

炎症与免疫：类风湿关节炎、动脉粥样硬化中的巨噬细胞活化。

肿瘤研究：OPN在肿瘤转移（如乳腺癌、前列腺癌）中的作用。

肾脏疾病：慢性肾病、肾结石中的OPN水平变化。

7. 注意事项

避免污染：使用无热原、无酶污染的耗材。

标准曲线：每次实验需重新绘制，避免批次差异。

样本稀释：高浓度样本（如骨组织匀浆）需预实验确定最佳稀释倍数。

复孔检测：建议每个样本做2-3个复孔，提高准确性。

公司正在出售的产品：