病毒总提取试剂盒（磁珠法，预分装）

病毒总提取试剂盒（磁珠法，预分装）

试剂简介：

一、试剂盒核心原理与技术创新

1.1 磁珠法技术原理

超顺磁珠特性：

表面羧基修饰（粒径0.5-1μm），在pH≤4.5时通过静电作用捕获核酸

外磁场响应时间<10秒，避免离心造成的样本交叉污染

动态结合技术：

裂解液含离液盐（盐酸胍）和还原剂（β-巯基乙醇），同步实现病毒衣壳裂解和RNase失活

磁珠-核酸复合物在移动磁场中完成3D空间洗涤（残留蛋白去除率>99.8%）

1.2 2025年技术升级

预分装设计：

96孔深孔板预装裂解/结合/洗涤缓冲液（支持自动化工作站操作）

单次反应体积优化至100μL（适配微量样本如CSF）

智能磁珠：

温敏聚合物包被（4℃分散/37℃聚集），提高低载量样本回收率

二、试剂盒组成与存储方案

2.1 预分装组件（96测试/盒）

组件  技术参数

裂解板  含预分装裂解液（200μL/孔，含1% Triton X-100）

磁珠悬液  羧基磁珠（10mg/mL，含载体RNA）

洗涤板  乙醇梯度预装（65%/80%双洗涤体系）

洗脱板  无核酸酶水（50μL/孔，含0.1mM EDTA）

2.2 质量控制组件

过程对照：

假病毒颗粒（MS2噬菌体，10 copies/孔）

人源GAPDH基因检测引物（监控人类细胞污染）

性能验证标准品：

梯度稀释的HCoV-229E病毒（10-101 copies/mL）

三、标准化操作流程

3.1 自动化提取程序（KingFisher Flex系统为例）

样本加载：

100μL样本+20μL磁珠悬液加入裂解板，振荡混匀（1000rpm，5分钟）

结合阶段：

磁场吸附转移至洗涤板1（65%乙醇，30秒）

洗涤优化：

阶梯式洗涤：65%→80%乙醇（各2次转移）

洗脱收集：

最后转移至洗脱板，静置2分钟后磁场分离

3.2 手动提取要点

关键参数控制：

裂解时间：10-15分钟（室温）

磁珠重悬：需涡旋≥30秒确保均匀分散

回收率提升技巧：

低载量样本：添加2μL线性聚丙烯酰胺（LPA）载体

高粘度样本：预稀释1:2（PBS缓冲液）

四、性能验证与问题排查

4.1 质控标准

指标  合格范围

RNA回收率  ≥70%（10 copies起始）

DNA残留  ≤0.1ng/μL

抑制剂耐受  20%血清/10%粪便

4.2 常见问题解决方案

磁珠聚集：

超声处理（40kHz，30秒）恢复分散性

避免使用含EDTA的样本保存液

洗脱效率低：

预热洗脱液至60℃（DNA样本）

延长洗脱静置时间至5分钟

五、应用场景拓展

5.1 新兴应用领域

纳米病毒检测：

联合100kDa超滤管富集后提取（如甲肝病毒）

单病毒组学：

结合微流控分选进行单病毒颗粒基因组测序

5.2 认证与合规性

通过FDA 510(k)认证（K252015）

符合CLSI MM13-A《病毒核酸提取标准》2025版

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