肠出血性大肠杆菌 O104:H4 检测试剂盒 新品

肠出血性大肠杆菌 O104:H4 检测试剂盒

试剂简介：

检测目标：特异性检测肠出血性大肠杆菌O104:H4，该菌株是2011年德国疫情暴发的致病菌，兼具EHEC产志贺毒素（Stx2）和EAEC聚集性黏附（aggR基因）双重特征。

方法原理：基于多重荧光PCR，同步检测：

O104血清型特异性基因（如wzxO104或rfbO104）。

志贺毒素基因（stx2）。

聚集性黏附调控基因（aggR）。

适用样本：粪便（首选）、可疑污染食品（如芽苗菜）、环境样本。

2. 检测流程

样本前处理

粪便样本：1 g加9 mL PBS匀浆，离心取上清（避免纤维残渣）。

食品样本：需增菌培养（如mTSB+新生霉素，37℃ 6h）。

核酸提取

推荐磁珠法提取DNA（如QIAamp DNA Mini Kit），需去除多糖类抑制物。

PCR扩增

反应体系：

通道1（FAM）：wzxO104（血清型标记）。

通道2（HEX）：stx2（毒力标记）。

通道3（CY5）：aggR（黏附标记）。

内参（VIC）：如uidA（大肠杆菌通用基因）。

循环程序：95℃ 3min →（95℃ 15s → 60℃ 45s）×45循环。

结果判读

阳性：三靶标（wzxO104+stx2+aggR）Ct≤35，且内参正常。

可疑：仅1-2靶标阳性，需测序确认（如O104型非H4亚型）。

3. 性能参数

指标  参数要求

灵敏度  ≤10 CFU/反应（纯培养）

特异性  不与O157:H7或其他EAEC交叉

检出限  100%检出率（10^3 CFU/g粪便）

抗干扰性  耐受15%胆汁或食品基质

4. 注意事项

假阳性风险：

其他产Stx2的大肠杆菌（如O157）需通过wzxO104排除。

aggR阳性可能为单纯EAEC，需结合血清型确认。

生物安全：O104:H4为BSL-2病原体，操作需在生物安全柜中进行。

质控要求：每批次需包含：

阴性对照（非O104大肠杆菌）。

阳性对照（含三靶标质粒）。

5. 应用场景

疫情溯源：食源性暴发事件（如芽苗菜污染）的快速排查。

临床诊断：溶血性尿毒综合征（HUS）患者的病原确认。

进口食品检疫：高风险食品（如生鲜蔬菜）的监测。

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