肠出血性大肠杆菌血清型PCR检测试剂盒 新品

‌产品名称：肠出血性大肠杆菌血清型PCR检测试剂盒

英文名称：Enterohemorrhagic E. coli(EHEC)O157PCR

货号：YS-P014149

分类：PCR检测试剂盒

规格‌：50T/盒

检测原理：
引物针对肠出血性大肠杆菌毒力基因 stx、eae 设计，特异性识别致病血清型菌株

细菌细胞壁裂解提取基因组 DNA，通过变性 - 退火 - 延伸循环快速富集毒力基因片段

扩增终点琼脂糖电泳观察特异性条带，有条带即为检出目标致病性血清型
实验流程：
样本处理（样本处理区）

推荐使用磁珠法或离心柱法提取核酸，避免交叉污染。

试剂配制（试剂准备区）

反应体系（20μL/管）：19μL反应液 + 1μL酶液，分装后加入5μL待测核酸或质控品。

PCR扩增（核酸扩增区）

循环参数：

预变性：95℃ 2min（1循环）；

扩增：95℃ 15sec → 60℃ 30sec（45循环，60℃时采集荧光信号，FAM通道）。

结果分析

阳性：Ct值≤40，扩增曲线呈指数增长；

阴性：无Ct值或曲线平直；

可疑：40<Ct≤45，需复测确认。

质控要求：阳性质控Ct≤32，阴性质控无扩增。

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注意事项：
所有试剂避免反复冻融，可分装小体积冻存；融化后冰上放置不超过 2 h，酶失活会直接导致无扩增条带

阳性质粒拷贝数极高，开盖全程在生物安全柜操作，防止气溶胶污染实验室

所有耗材必须无核酸酶，枪头一次性使用；实验后 PCR 管、废液 121℃高压灭菌后丢弃

试剂盒出现浑浊、变色、结冰分层、过期禁止使用

仅限科研检测，严禁用于人体临床疾病诊断、食品出厂检疫等合规检测场景

土壤、粪便、腐殖质样本优先使用磁珠法提取核酸，减少抑制剂干扰