绵羊肺成纤维细胞；SheepL1 新品

产品信息：

来源与背景

源自绵羊（Ovis aries）肺组织。

应用领域：

病毒宿主互作：研究绵羊源病毒（如蓝舌病病毒）的感染机制；

肺纤维化模型：模拟特发性肺纤维化（IPF）的细胞外基质重塑过程；

药物筛选：评估抗纤维化药物（如吡非尼酮）对胶原合成的抑制作用。

生长特性：严格贴壁生长，形成网状结构，增殖速度中等（传代周期2-3天）。

关键优势：可稳定表达荧光标记（如SheepL1/RFP），适用于活细胞示踪。

二、培养操作指南

培养体系与条件

基础培养基  DMEM（高糖）或MEM

添加成分  10%胎牛血清（FBS） + 1%青霉素-链霉素（P/S）

培养环境  温度：37℃ ；

气相：空气95% + CO? 5%  

传代比例  1:2至1:6（胰酶消化时间1-2分钟）

冻存条件  90%完全培养基 + 10% DMSO，液氮储存

操作步骤

复苏

37℃水浴快速解冻冻存管，加入5 mL完全培养基混匀，离心（1000 RPM，5分钟）后重悬接种至T25瓶。

关键点：次日换液去除死细胞，连续观察2-3天。

传代

PBS清洗后，加入0.25%胰蛋白酶-EDTA消化1-2分钟（显微镜下观察细胞变圆脱落），加完全培养基终止消化。

注意事项：

消化时间需严格控制（过度消化损伤细胞）；

吹打均匀避免细胞团块。

冻存

汇合度80%时消化，离心后用冻存液重悬，程序降温（-1℃/min）至-80℃后转入液氮。

三、关键注意事项

污染防控

定期检测支原体（推荐PCR法），避免真菌污染（培养基中可添加两性霉素B）。

培养细节

贴壁问题：若运输后细胞脱落，可离心收集（1000 RPM，5分钟）后重新接种。

荧光标记细胞：SheepL1/RFP需用嘌呤霉素（4 μg/mL）维持筛选压力。

实验应用

病毒接种：细胞汇合度90%时接种病毒，37℃培养可提高病毒复制效率。

胶原分泌检测：ELISA法测定I型/III型胶原表达（刺激后48小时）。

四、常见问题与解决方案

问题  原因  解决方案

细胞消化过度  胰酶作用时间过长  缩短至1分钟内，及时终止消化

生长缓慢  血清质量或密度过高  更换优质FBS，密度控制在5×10? cells/mL

荧光信号减弱  传代次数过多或抗生素失效  每10代用嘌呤霉素巩固筛选

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细胞类型与特性

原代细胞：直接从组织中分离的细胞，通常指第1-10代细胞，具有接近体内状态的特性。

细胞系：原代细胞首次传代成功后形成的细胞群，可连续传代。

细胞株：从原代培养或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞，通常为第10-50代。

根据生长方式分为：

贴壁细胞：需附着在培养瓶表面生长，如成纤维细胞、上皮细胞。

悬浮细胞：在培养基中自由悬浮生长，如血液细胞。

半贴壁半悬浮细胞：兼具贴壁和悬浮生长特性。