人食管鳞癌细胞；KYSE-450 新品

产品信息：

来源与背景

源自一名59岁男性食管中段鳞状细胞癌组织（侵袭深度不超过粘膜下层），由日本学者建立。

分子特征：携带p53突变及MYC癌基因扩增，具备高度代表性。

应用领域：

食管癌发生机制（如癌基因突变、表观遗传调控）

药物敏感性检测（如化疗/靶向药物筛选）

信号通路研究（PI3K/AKT、MAPK、Notch通路）

形态与生长

形态：上皮细胞样，呈不规则多边形或长梭形。

生长特性：贴壁生长为主，部分悬浮细胞需离心收集。

倍增时间：约2-3天（37℃条件下）。

二、培养操作指南

培养体系与条件

基础培养基  高糖DMEM或MEM/F12

添加成分  10%胎牛血清（FBS）

培养环境  温度：37℃ ；

气相：空气95% + CO? 5%  

传代比例  1:2至1:3（贴壁细胞需胰酶消化）

冻存条件  50%培养基 + 40% FBS + 10% DMSO，液氮储存

操作步骤

复苏

37℃水浴快速解冻，离心（1000 RPM，5分钟）去除冻存液，重悬于预热培养基，T25瓶培养过夜。

关键点：次日换液去除死细胞，连续观察2-3天。

传代

PBS清洗后，加入0.25%胰蛋白酶-EDTA消化1-2分钟（细胞变圆即终止），加完全培养基终止消化。

注意事项：

消化时间需严格控制（过度消化损伤细胞）；

悬浮细胞可直接离心传代（1000 RPM，5分钟）。

冻存

汇合度80%时消化，离心后用冻存液重悬，程序降温（-1℃/min）至-80℃后转入液氮。

三、关键注意事项

污染防控

定期检测支原体（推荐PCR法），避免交叉污染。

培养细节

贴壁问题：若运输后细胞脱落，可离心收集（1000 RPM，5分钟）后重新接种。

血清浓度：初始培养可提高至15% FBS促进贴壁，稳定后恢复10%。

实验应用

药物敏感性检测：推荐CCK-8或MTT法（接种密度5×103 cells/孔）。

基因编辑：CRISPR-Cas9转染效率较高（建议使用脂质体试剂）。

四、常见问题与解决方案

问题  原因  解决方案

细胞消化过度  胰酶作用时间过长  缩短至1分钟内，及时终止消化

生长不均（岛状）  细胞团块未吹散  消化后轻柔吹打均匀

悬浮细胞增多  消化不足或贴壁能力下降  优化胰酶浓度，离心收集悬浮细胞

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细胞类型与特性

原代细胞：直接从组织中分离的细胞，通常指第1-10代细胞，具有接近体内状态的特性。

细胞系：原代细胞首次传代成功后形成的细胞群，可连续传代。

细胞株：从原代培养或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞，通常为第10-50代。

根据生长方式分为：

贴壁细胞：需附着在培养瓶表面生长，如成纤维细胞、上皮细胞。

悬浮细胞：在培养基中自由悬浮生长，如血液细胞。

半贴壁半悬浮细胞：兼具贴壁和悬浮生长特性。