超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒(NBT法)/分光光度法/96样 新品

超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒(NBT法)/分光光度法/96样

测定意义：

SOD（EC 1.15.1.1 ）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化超氧化物阴离子发生岐化作用，生成 H2O2和 O2 。SOD  不仅是超氧化物阴离子清除酶，也是 H2O2  主要生成酶，在生物抗氧化系统中具有重要作用。

测定原理：

通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子(O2-)，O2-可还原氮蓝四唑生成蓝色甲臜，后者在 560nm  处有吸收；SOD  可清除 O2-，从而抑制了甲臜的形成；反应液蓝色越深，说明 SOD  活性愈低，反之活性越高。

自备仪器和用品：

酶标仪、离心机、移液器、96  孔板、研钵、冰和蒸馏水。

测定步骤：
1、 酶标仪预热 30min   以上，调节波长至 560nm。

2 、将试剂二用蒸馏水稀释两倍，用多少配多少。（试剂二和蒸馏水 1 ：1  稀释）

3 、将一瓶试剂四用 5mL  蒸馏水溶解（溶解后一周内用完），再用蒸馏水稀释 4  倍，用多少配多少（试剂四和蒸馏水 1 ：3  稀释）。

4 、测定前将试剂一、三和四在 37℃（哺乳动物）或 25℃（其他物种）水浴 5min   以上。

5、 样本测定（在 EP  管或 96  孔板中依次加入下列试剂）。

注 意：

1、试剂二为酶，不可冷冻，使用时在冰上放置。

2、对照管只需要做一管。

3、若对照管吸光值大于 1，建议将试剂二用蒸馏水稀释 7  倍后使用（10 μL  试剂二原液+60μL 蒸馏水）。

4 、SOD 为什么有的样本测定管大于对照管，对照管数值在什么范围？
对照管的范围是 0.4-1。对照管吸光值过低可能是

（1）试剂二或试剂四没有现配现用；

（2)    没有按顺序加试剂；

（3）反应时间不够，可以延长反应时间（反应时间 30min  可以延长到 40min）。对照管吸光值过高可能是试剂二未按操作说明书稀释相应倍数。若出现测定管大于对照管，可能是样本中杂质的影响太大，为了降低杂质的影响一般将样本提取上清液用蒸馏水或提取液稀释 10  倍后再测，通常可以使测定正常。计算公式中乘以相应稀释倍数。