6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)试剂盒(WST-8法)分光法/48样 新品

6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)试剂盒(WST-8法)分光法/48样

产品简介：

6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G6PDH；EC 1.1.1.49）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是磷酸戊糖途径的关键酶，同时维持 NADPH 在细胞内的水平，NADPH 反过来维持细胞中谷胱甘肽水平进而保护细胞免受氧化损伤。因此 G6PDH 活性的高低可以从一定程度上反映生物体的生物合成和抗氧化能力。G6PDH 催化 6-磷酸葡萄糖氧化为 6 -磷酸葡萄糖酸内酯，同时将 NADP+还原为 NADPH，传统方法是检测 NADPH 在 340nm 处的吸光值。由于 NADPH 的摩尔消光系数（ε）较低，所以这种方法灵敏度低，且严重受到干扰。本试剂盒提供一种简单，灵敏，快速的测定方法：该酶促过程产生的 NADPH 与特异显色剂反应产生在 450nm 处有大吸收峰的有色物质，通过检测 450nm 处的增加速率，进而计算出 G6PDH 酶活性大小。

试剂盒组成和配制：

所需的仪器和用品：
可见分光光度计、 1mL 玻璃比色皿（光径  1cm）、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰。

6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-PGDH)活性测定：
建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样本情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费!

样本制备：
① 组织样本：

称取约 0.1g 组织，水分充足的样本可取约 0.5g，加入  1mL 提取液，进行冰浴匀浆， 12000rpm，室温离心  10min，取上清液待测 。（若组织样本蛋白含量很高，可进行脱蛋白处理）。

[注] ：若增加样本量，可按照组织质量（g）： 提取液体积(mL)为  5~10： 1 的比例进行提取。

② 细菌/培养细胞：

先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约  500 万细菌或细胞加入  1mL 提取液，超 声 波破 碎 （冰浴 ， 功 率  20 ％ 或  200W ， 超 声  3s ， 间 隔  10s ， 重 复  30  次 ）， 12000rpm，室温离心  10min，取上清液待测。

[注] ：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（10⁴)： 提取液（mL）为  500~1000： 1 的比例进行提取。

③ 液体样本：

 直接检测。若浑浊，离心后取上清检测。