转氢酶-2测定试剂盒/微量法/96样 新品

转氢酶-2测定试剂盒/微量法/96样

测定意义：

TH 位于线粒体的内膜上，又称为线粒体复合体六，催化 NADH+NADP+和 NAD++NADPH 相互转化，调节线粒体 NAD(H)和 NADP(H)平衡。把逆向反应称为 TH-2，催化 NADPH 和 NAD+生成 NADP+和 NADH。

测定原理：

NADH 和 NADPH 均在 340nm 有特征吸收，因此 TH 催化的转氢反应不能导致 340nm 吸光度发生变化。用人工合成底物3-乙酰吡啶腺嘌呤二核苷酸（APAD+ ）替代 NAD+ ，TH-2 催化 APAD+还原生成 APADH ， APADH 在 375nm 有特征光吸收，测定 375nm 光吸收的增加速率，来计算 TH-2 活性。

自备仪器和用品：

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水

测定步骤：

1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 375nm，蒸馏水调零。

2、 样本测定

（1）工作液的配制：临用前将试剂四、五转移到试剂三中混合溶解，置于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 5min；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

（2）在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 20μL 样本和 180 μL 工作液，混匀，立即记录 375nm 处初始吸光值 A1 和 10min 后的吸光值 A2 ，计算 ΔA=A2-A1。

注 意：

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。