支链-直链-总淀粉含量试剂盒(酶法)微板法/96样 新品

支链/直链/总淀粉检测试剂盒

微量法100样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

简介：

谷物淀粉中的直链淀粉最常见的测定方法是对直链淀粉的碘结合能力进行电位法、电流法或比色法测量，从而形成直链淀粉-碘包合复合物。谷物淀粉中的支链淀粉也会与碘形成支链淀粉-碘复合物，它们会降低通过非比色法测量的游离碘的浓度，并且可能会在与比色法中的直链淀粉-碘复合物相似的波长处吸收。

本试剂盒利用刀豆球蛋白A（ConA）仅与支链淀粉特异性结合、不与直链淀粉结合的特性，实现直链淀粉与支链淀粉的有效分离；随后采用仅能水解淀粉的酶复合物，将分离后的淀粉水解为葡萄糖，通过检测反应体系中葡萄糖的含量，即可计算得出直链淀粉、支链淀粉及总淀粉的具体含量。

自备试剂:

1.乙酸钠缓冲液（100mM，pH4.5）：

向900mL蒸馏水中添加5.9mL冰醋酸，通过添加NaOH溶液将pH值调节至pH4.5，加入0.2g叠氮化钠（防腐剂，若没有该试剂可不添加），调节体积至1L。

2.浓缩ConA溶剂（600mM，pH6.4醋酸钠缓冲液）：

称取49.2g无水乙酸钠，175.5gNaCl，0.5g2H2O·CaCl2，0.7g6H2O·MgCl2和0.7g4H2O·MnCl2，后加入900mL蒸馏水。逐滴加入冰醋酸，调节pH至6.4（不能低于6.4，否则重新配置），然后用蒸馏水将其定容至1L。

3.ConA溶剂（工作浓度）：取30mL浓缩ConA溶剂用蒸馏水将其定容（比例为3：7）至100mL，现用现配。

所需仪器和用品:

可见分光光度计、10mm玻璃比色皿、水浴锅、可调式移液器、冰、二甲基亚砜（DMSO,分析级）、乙醇、乙酸和蒸馏水

样本制备：

1.准确称量淀粉或面粉样品（样本需研磨细度要求通过1.0mm筛）20±0.2mg，放入10mL离心管中。

2.向离心管中加入1mLDMSO，同时在涡旋仪上低速轻轻搅拌；之后盖上管子，在100℃沸水浴中加热，直到样品完全分散（约1min）。

注意：需确保没有凝胶状的淀粉块存在。

3.在涡旋仪上高速搅拌离心管中的内容物，并将离心管放入水浴锅中100℃温育15min，期间拿出使用涡旋仪混匀3~5次。

4.加热结束后，立即对样品进行涡旋并加入2mL95%(v/v)乙醇，继续在涡旋仪上持续搅拌均匀，随后加入4mL95%(v/v)乙醇，盖紧管盖并轻轻颠倒几次使样品与液体充分混合15min。

注意：倒置静置时管中会形成淀粉沉淀，为正常现象。

5.将第4步所得样品于2000g离心5min，弃去上清液，并将离心管倒置在纸巾上沥干10min，确保所有的乙醇都已排空，所得沉淀用于在随后的直链淀粉和总淀粉测定中。

6.将盛有淀粉样品沉淀的离心管置于涡旋仪上，边轻轻涡旋边加入2mLDMSO，随即充分涡旋混匀。之后将离心管放入水浴锅中100℃沸水浴15min，期间不时轻轻搅拌，避免形成凝胶状结块。

7.将试管从沸水浴中取出，冷却至室温后，加入4mLConA溶剂并充分混合，将内容物全部定量转移至25mL容量瓶中，并用ConA溶液多次润洗试管，定容至刻度，即为待测液。

注：若是谷物样本，第6步得到的溶液中有杂质，需待自然冷却5min后，于室温下3000g离心5min（温度低于10℃易发生冻结，需注意），取上清液备用；若是纯淀粉样本，第6步得到的溶液呈澄清状，不需离心自然冷却即可。

注意：样品应在2小时内进行检测。