牛巴氏杆菌(PB)检测试剂盒(荧光PCR法) 新品

牛巴氏杆菌(PB)检测试剂盒(荧光PCR法)

简介：

牛巴氏杆菌（Pasteurella multocida）是一种常见的动物病原菌，可引起牛出败等疾病。荧光PCR法是一种快速、灵敏的分子生物学检测方法，广泛应用于牛巴氏杆菌的检测。以下是牛巴氏杆菌检测试剂盒（荧光PCR法）的详解说明及特点：

检测原理

利用TaqMan探针法或SYBR Green染料法实时监测PCR扩增过程。特异性引物和探针针对牛巴氏杆菌的保守基因区域（如16S rRNA基因）设计，扩增时释放荧光信号，通过Ct值（循环阈值）判断样本中是否存在目标DNA。

试剂盒组成

PCR反应液：含缓冲液、dNTPs、引物和探针。

酶混合物：含Taq DNA聚合酶和尿嘧啶DNA糖基化酶（UNG，防污染）。

阳性对照：含牛巴氏杆菌DNA，用于验证试剂盒有效性。

阴性对照：无菌水或无模板对照（NTC），用于排除污染。

核酸提取试剂（可选）：用于从样本中提取DNA。

检测步骤

样本采集：采集疑似感染动物的血液、组织或分泌物样本，确保无菌操作。

核酸提取：使用试剂盒提供的提取试剂或自动化提取仪，从样本中提取DNA。

配制反应体系：在冰上操作，将提取的DNA、PCR反应液和酶混合物按比例混合，避免气泡。

PCR扩增：将反应管放入荧光定量PCR仪，设置扩增程序（通常包括预变性、循环扩增和熔解曲线分析）。

结果分析：通过仪器软件分析荧光信号，根据Ct值判断结果。Ct值越小，说明样本中目标DNA含量越高。

结果判定

阳性：Ct值≤35且有明显指数增长曲线，表明样本中存在牛巴氏杆菌。

可疑：Ct值在35至38之间，建议重复检测。

阴性：Ct值>38或无Ct值，表明样本中未检测到牛巴氏杆菌。

注意事项

严格分区操作（试剂准备区、样本处理区、PCR扩增区），避免交叉污染。

所有试剂和样本处理应在生物安全柜中进行，操作人员需穿戴防护装备。

定期维护和校准PCR仪器，确保检测结果的准确性。

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