钙离子荧光探针Cal-520 NHS酯 新品

钙离子荧光探针Cal-520 NHS酯优势  

1.低背景荧光：与Ca²⁺结合后显著增强荧光信号，能有效降低背景干扰，提高检测灵敏度。

2.多色兼容性：绿色荧光，适用于多通道成像

3.高效偶联特性：含NHS活性基团，可直接偶联抗体/IgG等生物分子

钙离子荧光探针Cal-520 NHS酯标记实验流程

此标记方案是为山羊抗小鼠IgG与Cal-520® NHS酯而开发的。对于您的特定蛋白质，您可能需要进一步优化。

注意：每种蛋白质需要不同的染料/蛋白质比率，这还取决于染料的特性。过度标记蛋白质可能会对其结合亲和力产生不利影响，而低染料/蛋白质比率的蛋白质共轭物会降低灵敏度。

运行共轭反应

1.以10:1的摩尔比（B液（染料）/A液（蛋白质））作为起始点：取95μL A液（假设蛋白浓度10mg/mL，MW~200kD，则浓度~0.05mM），加入5μL B液（10mM）。

注意：建议使用B液（染料）/A液（蛋白质）的10:1摩尔比。如果比例过低或过高，分别在5:1、15:1和20:1的染料/蛋白质比下确定合适的比例。

2.室温震荡反应30-60分钟

纯化步骤（Sephadex G-25柱示例）

1.按说明书预处理Sephadex G-25柱

2.上样反应混合物（将反应混合物加载到Sephadex G-25柱的顶部。）（来自“运行共轭反应”）

3.样品刚运行到树脂表面下方时，立即加入PBS（pH 7.2-7.4）洗脱

4.持续加入PBS缓冲液（pH 7.2-7.4）进行洗脱，直至目标样品完全流出层析柱。合并含有染料-蛋白偶联物的洗脱组分。

注意：

短期使用建议：如立即使用，必须用染色缓冲液适当稀释偶联物，按实验需求分装为单次使用量

长期保存方案：如需长期储存，染料-蛋白偶联物溶液需要浓缩或冻干。

注：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！