Rhod-2, AM, 钙离子荧光探针

产品简介

Rhod-2 是一种高亲和力的可见光激发波长 Ca2+荧光探针。类似于Fluo-3 或Fluo-4，其激发和发射光谱不会随着 Ca2+浓度变化发生明显的迁移，荧光信号一旦与 Ca2+结合后明显增强。不同于 Fluo-3 或 Fluo-4，Rhod-2的波长更长（Ex/Em=549/578 nm），这一特性使其更适合具高水平自荧光信号细胞或组织的 Ca2+水平检测，还可用来检测由光感受器和笼锁Ca2+螯合剂光激活导致的Ca2+释放。Rhod-2, AM 是Rhod-2 的一种乙酰甲酯衍生物，具有细胞膜渗透性，只需简单培养，即可轻易进入细胞。一旦进入细胞内，即被其内酯酶剪切生成不具膜渗透性的 Rhod-2，从而滞留在胞内以发挥相应生理功能。长波长钙离子探针，能够与GFP和绿色荧光探针兼容。多种检测平台:荧光成像，流式细胞术，酶标仪，高内涵筛选(HCS)。

本品Rhod-2, AM, 钙离子荧光探针以冻干粉的形式提供，使用时只需经无水 DMSO 充分溶解，配置成 2~5mM 的储存液，并依据具体实验和相关文献资料调整到需要的工作浓度即可。 

基本特性

CAS ：129787-64-0

化学名：9-[4-[bis[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethyl]amino]-3-[2-[2-[bis[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-

oxoethyl]amino]phenoxy]ethoxy]phenyl]-3,6-bis(dimethylamino)-xanthylium, monobromide

同义名：Rhod-2, Acetoxymethyl Ester

分子式：C52H59BrN4O19

分子量：1123.94

外观：红色固体

最大激发/发射波长：549/578 nm

Kd（Ca2+结合）：570nM

溶解性：溶于 DMSO（2~5mM）

储存条件：-20℃避光干燥保存，1年有效。

使用方法（仅供参考）Rhod-2, AM, 钙离子荧光探针

一、试剂准备

1）配制 Pluronic F-127 母液：称取 100mg Pluronic F-127 粉末（货号：Cat No. FS0432）中加入 500μl DMSO，配制成 20%(w/v) DMSO 母液。溶解过程需要在 40-50℃加热 20-30min。溶液室温保存，不用冷藏。如有结晶析出，可以重新加热后溶解，不影响使用。

2）HHBS Buffer (1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer, pH 7.3)（货号：Cat No. FSH043） 或者其他生理缓冲液

二、操作步骤

1）用无水 DMSO 溶解 Rhod-2, AM 配制成 2-5mM 的储存液，或将已配好的 Rhod-2, AM 储存液取出于室温回温。（如：若配制成 4mM 的母液，需向 50µg Rhod-2, AM 中加入 11.1µl 无水 DMSO（货号：Cat No. FS0306）。准备 Rhod-2, AM 工作液之前，有时需要往 Rhod-2, AM 储存液中加入适量的 20% Pluronic F-127 溶液，以增强 AM探针的水溶性。

【注①】：Rhod-2, AM 染色工作液制备前，添加等体积 20% Pluronic F-127 溶液到 Rhod-2, AM+DMSO储存液，从而使 Pluronic F-127 的最终工作浓度约为 0.02%。

【注②】：Pluronic F-127 可以防止 AM 探针在溶液中聚合并促使探针更好进入细胞。但 Pluronic F-127

可降低 AM 探针的稳定性，因此只建议在配制工作液时加入，不建议加入储存液长期保存。

2）用 HHBS 或其他生理缓冲液将 Rhod-2, AM+DMSO 储存液稀释到 1-10µM 的工作液。

【注①】：Rhod-2,AM 应用在大部分细胞的推荐加载浓度为 4-5µM，具体的使用浓度需根据实验要求

进行优化。为了避免过度加载造成细胞毒性，建议在取得有效结果的基础上尽量使用最低探针浓度。

【注②】：Rhod-2, AM 工作液需现配现用，避免反复冻存。

3）【可选】如果细胞内含有机阴离子转运体，丙磺舒（Probenecid，1-2.5mM）或磺吡酮（Sulfinpyrazone，

0.1-0.25mM）可能需要加入细胞培养基内，以降低去酯化探针的泄露水平。

【注①】：丙磺舒或磺吡酮储存液相当偏碱，因此加入培养基后需要重新调整 pH。

4）将准备好的 Rhod-2, AM 工作液加入细胞，加入量以覆盖细胞为准。37℃孵育 20min-2h。

【注①】：若使用含血清的培养基，血清内酯酶会降解 AM，从而降低 Rhod-2, AM 加载效果。而含酚

红培养基会使本底值略偏高，建议加入染色工作液前，对细胞清洗 2~3 次。

【注②】：关于孵育的时间，如果首次做实验不能确定，建议先孵育 30min，看荧光效果；如果细胞死

亡较多，适当缩短时间；如果荧光强度太弱，适当延长时间。

【注③】：降低探针加载温度可能会降低探针的区室化现象。

5）吸掉染色工作液，并用 HHBS 或其他生理缓冲液（如有必要，使用含转运体抑制剂如 2.5mM 丙磺舒的缓冲液）清洗细胞 1~2 次，以去除残留探针。

6）室温再孵育 30min 以保证细胞内 AM 的完全去酯化。

7）用适当的仪器如激光共聚焦、流式细胞仪、荧光酶标仪，以及波长 Ex/Em=549/578 nm 来进行检测。注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

3）Rhod-2从低浓度Ca2+到高浓度Ca2+的荧光增强程度低于Fluo-3，Rhod-2的荧光信号弱于Fluo-3。

4）乙酰氧基甲基酯（AM）易吸潮，冰箱取出后请在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉末落入管底。

5）Rhod-2, AM在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可在20-25℃温育片刻至全部融解后使用。

6）Rhod-2, AM第一次使用，建议储存液现配现用，分装成单次用量，严格做到≤-20℃密封干燥冻存，以防止受潮。为了保证良好的实验效果，尽量在短时间内使用。