真核生物18S检测试剂盒（PCR-荧光探针法）

商品属性：

产品概述

真核生物18S rRNA基因检测试剂盒是一种用于定性检测样本中真核生物来源成分的分子生物学产品。

与检测特定病原体的试剂盒不同，该试剂盒的目标是真核生物基因组中一段高度保守的基因序列。它的主要作用是作为内参照或内标，广泛应用于生命科学研究的多个领域，以确保实验过程的准确性与可靠性。

二、 检测目标：18S rRNA基因详解说明

基因名称：18S核糖体RNA基因。

性质：该基因是真核生物核糖体小亚基（40S）的组成部分，存在于所有真核生物的基因组中，且具有以下特点：

普遍存在性：从酵母、真菌、植物到动物（包括人类），所有真核生物都含有该基因。

高度保守性：其序列在不同真核生物间既有保守区（用于设计通用引物/探针），又有可变区（可用于区分物种），使其成为理想的通用型靶标。

高拷贝数：在基因组中为多拷贝，易于检测，灵敏度高。

三、 检测原理（PCR-荧光探针法）

其核心原理是实时荧光定量PCR。

DNA提取：从待测样本（如组织、细胞、环境样本等）中提取总DNA。

荧光PCR扩增与检测：

通用性引物：试剂盒中的引物是针对18S rRNA基因的保守区域设计的，因此能够与绝大多数真核生物的该基因结合。

特异性探针：一条与保守区序列互补的寡核苷酸探针，两端分别标记有荧光报告基团和淬灭基团。

实时信号释放：在PCR扩增过程中，Taq酶的5'→3'外切酶活性会切割探针，使报告基团与淬灭基团分离，发出荧光信号。

信号监测：荧光PCR仪实时监测荧光强度。如果样本中含有任何真核生物来源的DNA，该基因就会被扩增，荧光信号随之累积。

结果判定：当荧光信号超过预设阈值时，仪器会记录循环数（Ct值），并据此判断阳性或阴性。

四、 试剂盒主要组成

PCR反应液：含有缓冲液、dNTPs、Mg2?等。

热启动Taq DNA聚合酶。

18S rRNA基因通用引物和探针混合液。

阳性对照：通常含有已知浓度的真核细胞基因组DNA（如小鼠、人、酵母等）。

阴性对照：无核酸酶水。

五、 操作流程

样本DNA提取：从待测样本中成功提取基因组DNA是关键的第一步。

试剂配制：将各组分按比例混合，分装到PCR管中。

加样：将提取的样本DNA、阳性对照、阴性对照分别加入反应管。

上机检测：将反应管放入荧光PCR仪，运行标准扩增程序。

结果分析：仪器软件自动分析荧光增长曲线和Ct值。

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六、 结果判读

阳性：检测通道出现典型的S型扩增曲线，且Ct值在合理范围内。这表明：

样本DNA提取成功。

样本中含有真核生物源性成分。

PCR反应体系工作正常，无抑制物存在。

阴性：无扩增曲线或Ct值极大。这表明：

样本中不含真核生物DNA。

DNA降解或提取失败。

PCR反应被严重抑制。

七、 产品特点与优势

极高的通用性：因其存在于所有真核生物中，一份试剂盒即可用于检测从真菌到动植物的广泛样本。

高灵敏度：由于是多拷贝基因，即使样本中真核细胞数量很少或DNA量很少，也能被有效检测出来。

质量控制的金标准：在各类分子生物学实验中，作为内参照来监控实验全过程的质量。

稳定性好：其表达量在不同生理状态下相对恒定，是作为内参的理想基因。