榛果源性检测试剂盒（PCR-荧光探针法）

榛果源性检测试剂盒（PCR-荧光探针法）

简介：

榛果源性检测试剂盒是一种基于实时荧光定量PCR技术的分子生物学产品。它不检测病原体，而是通过检测样品中是否存在榛果特有的DNA片段，来确认食品、饲料或环境样品中是否含有榛果成分。

核心应用：

过敏原标识与管理：检测食品中是否含有未声明的榛果成分，这对于榛果过敏人群的生命安全至关重要。

食品真实性鉴定：验证产品是否与其标称一致，例如检测巧克力、冰淇淋、饼干等产品中是否真正含有榛果，防止商业欺诈。

清洁验证：用于食品生产线清洁后的检测，确保没有榛果残留，避免交叉污染。

二、 检测原理：

其原理与前述荧光PCR法完全一致，关键在于其靶标是榛果特有的基因序列。

DNA提取：从加工或未加工的食品样品中提取总DNA。这一步的挑战在于从深度加工（如高温、高压）的食品中提取出足够量和质量的DNA。

PCR扩增与实时检测：

反应体系中包含一对针对榛果物种特异性基因片段设计的引物和一个荧光标记探针。常用的靶基因包括：

ITS（内源转录间隔区）

rbcL（核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶大亚基基因）

荧光信号采集：在PCR循环过程中，如果样品中含有榛果DNA，探针会被水解，释放出荧光信号。

结果判定：仪器实时监测荧光信号。通过分析Ct值，不仅可以进行定性判断（有/无），还可以进行半定量/相对定量分析，估算样品中榛果成分的大致含量。

三、 试剂盒组成（通常包含）：

DNA提取试剂：用于从复杂的食品基质中提取DNA。

PCR反应液：含有针对榛果特异性基因的引物、探针、dNTPs、缓冲液等。

热启动Taq DNA聚合酶。

阳性对照：通常含有已知浓度的榛果DNA。

阴性对照：无核酸酶水。

四、 操作流程：

样品制备与DNA提取：将样品（如巧克力酱、饼干碎）进行研磨和均质化，然后使用试剂盒提供的方法提取DNA。

试剂配制：在PCR管中混合反应液、酶、待测DNA模板及阴阳性对照。

上机检测：

将反应管放入实时荧光PCR仪。

设置程序：预变性（~95°C）→ 40-45个循环的 [变性 + 退火/延伸/荧光采集]。

结果分析：

实验有效性判断：

阳性对照：必须有典型的S型扩增曲线，Ct值在规定范围。

阴性对照：必须无扩增曲线。

样本结果判定：

阳性：样本出现S型扩增曲线，且Ct值小于或等于说明书规定的判定值（如Ct ≤ 35）。表明样品中含有榛果成分。

阴性：样本无扩增曲线。**表明在方法检测限下未检测到榛果成分。

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五、 主要特点与优势：

高特异性：能够准确区分榛果与其他坚果（如杏仁、核桃、腰果等），避免假阳性。

高灵敏度：即使样品中榛果含量极低（如0.1%或更低），也能有效检出。

抗加工处理干扰能力强：相对于检测蛋白质的ELISA方法，DNA在高温深加工过程中更为稳定。因此，对于烘焙、烧烤等加工食品，PCR法通常比ELISA法更可靠。

定量潜力：可提供Ct值，通过标准曲线可以对榛果含量进行相对定量或半定量。

适用于复杂基质：能够从巧克力、糖果、冰淇淋等多种成分混合的食品中检测出榛果。

自动化程度高，速度快：可在数小时内完成检测。

六、 应用场景：

食品生产企业：用于原料验收、生产过程控制、成品放行和过敏原清洁验证。

政府监管机构（如市场监管局）：用于市场抽查，监督食品标签的合规性与真实性。

第三方检测实验室：为社会提供商业性的过敏原检测服务。

科研机构：用于食品溯源、物种鉴定等研究。