大鼠Vitronectinelisa试剂盒

产品概述

本试剂盒用于定量检测大鼠血清、血浆或细胞培养上清液中的Vitronectin(VN)含量。采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)原理，具有高灵敏度、高特异性和良好的重复性。

规格: 96孔板

检测范围: 0.156-10 ng/mL

灵敏度: <0.078 ng/mL

样本类型: 血清、血浆、细胞培养上清液

保存条件: 2-8°C保存，有效期12个月

实验原理

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。将抗大鼠Vitronectin抗体包被于微孔板上，加入标准品或样本后，再加入生物素标记的抗大鼠Vitronectin抗体，形成抗体-抗原-抗体复合物。然后加入HRP标记的链霉亲和素，最后加入TMB底物显色。颜色的深浅与样本中Vitronectin的浓度成正比。

试剂盒组成

预包被微孔板: 96孔(8孔×12条)

Vitronectin标准品: 6管(0、0.156、0.312、0.625、1.25、2.5、5、10 ng/mL)

样本稀释液: 1瓶(20mL)

生物素标记抗体: 1瓶(120μL)

HRP标记链霉亲和素: 1瓶(120μL)

TMB底物溶液: 1瓶(10mL)

终止液: 1瓶(10mL)

洗涤缓冲液(20×): 1瓶(30mL)

封板膜: 3张

说明书: 1份

样本收集与处理

血清样本:

采集全血后室温静置30分钟

4°C 1000×g离心15分钟

立即分装上清，-20°C保存

血浆样本:

使用EDTA或肝素抗凝

采集后30分钟内4°C 1000×g离心15分钟

立即分装上清，-20°C保存

细胞培养上清液:

1000×g离心20分钟去除颗粒物

立即检测或-20°C保存

实验步骤

试剂准备:

将20×洗涤缓冲液用蒸馏水稀释至1×

标准品和样本使用前平衡至室温

加样:

设空白孔1孔，标准品孔7孔，样本孔若干

标准品孔加入50μL不同浓度标准品

样本孔加入40μL样本稀释液+10μL样本

孵育:

37°C孵育30分钟

洗板5次

加生物素标记抗体:

每孔加入50μL生物素标记抗体

37°C孵育30分钟

洗板5次

加HRP标记链霉亲和素:

每孔加入50μL HRP标记链霉亲和素

37°C孵育30分钟

洗板5次

显色:

每孔加入90μL TMB底物

37°C避光显色15-20分钟

终止反应:

每孔加入50μL终止液

测定:

450nm波长读取OD值

630nm作为参考波长

结果计算

计算标准品和样本的平均OD值

以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线

通过标准曲线计算样本浓度

若样本被稀释，需乘以稀释倍数

注意事项

不同批号试剂不可混用

避免反复冻融标准品和样本

实验前所有试剂应平衡至室温

严格按说明书操作，控制各步骤时间

避免TMB底物接触金属器械

终止液为酸性溶液，避免接触皮肤和眼睛

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