人胰岛素样生长因子结合蛋白6(IGFBP-6)elisa试剂盒

1. 基本介绍

目标分子：胰岛素样生长因子结合蛋白6（Insulin-like Growth Factor Binding Protein 6, IGFBP-6）是IGFBP家族关键成员，分子量约28-34kDa，以高亲和力特异性结合IGF-2为特征。

生物学特性：

结构特征：含保守的N/C端结构域，具有独特的肝素结合区

主要来源：成骨细胞、血管内皮细胞、多种肿瘤细胞

核心功能：

特异性调控IGF-2生物活性（比对IGF-1强100倍）

抑制血管生成和肿瘤转移

 参与骨代谢平衡

调节细胞凋亡过程

临床意义：

肿瘤预后标志物（乳腺癌、结肠癌、神经母细胞瘤）

骨质疏松症研究

血管生成异常疾病评估

生长发育监测（儿童IGF系统功能）

2. 检测原理

双抗体夹心ELISA法：

捕获抗体：微孔板包被抗IGFBP-6单抗（靶向N端表位）

样本反应：IGFBP-6与固相抗体特异性结合

检测抗体：加入生物素标记的抗IGFBP-6多抗（靶向C端）

信号放大：链霉亲和素-HRP复合物结合

显色系统：TMB显色，450nm/630nm双波长检测

试剂盒组成

组分  规格  保存条件  关键说明

预包被微孔板  96T（可拆）  2-8℃（带干燥剂）  避免潮湿

IGFBP-6标准品  0.25-16 ng/mL  -20℃  冻干粉需精密复溶

生物素标记抗体  1.0mL  -20℃（避光）  避免反复冻融

链霉亲和素-HRP  1.0mL  -20℃（避光）  使用前离心

样本稀释液  25mL  2-8℃  含蛋白稳定剂

TMB底物  12mL  2-8℃（避光）  开封后1月内有效

终止液  12mL  室温  强酸注意防护

20×洗涤液  50mL  室温  需1:19稀释

样本要求

适用样本类型：

血清（推荐无添加剂采血管）

血浆（EDTA抗凝优于肝素）

细胞培养上清（离心12000×g 10分钟）

骨组织匀浆（需特殊裂解处理）

样本处理规范：

采集后立即冰浴，1小时内离心（1500×g，15分钟，4℃）

分装储存于-80℃（冻融≤2次）

检测前室温平衡，避免震荡

粘稠样本（如骨髓液）需注明

检测流程

标准操作程序：

标准曲线制备：

梯度稀释：0.25、0.5、1、2、4、8、16 ng/mL

每孔100μL，建议复孔检测

关键步骤参数：

孵育条件：

样本孵育：37℃ 120±5分钟

检测抗体：37℃ 60±3分钟

洗涤程序：300μL/孔，浸泡30秒，洗5次

显色控制：TMB避光反应20±1分钟

质量控制要求：

空白孔OD值<0.1

标准曲线R2≥0.98

质控品回收率85-115%

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