人血管内皮生长因子165(VEGF165)elisa试剂盒

1. 基本介绍

目标分子：血管内皮生长因子165（Vascular Endothelial Growth Factor 165, VEGF165）是VEGF-A的主要剪接变体，含165个氨基酸，是调控血管生成的关键因子。

生物学特性：

分子量：38-45kDa（糖基化形式）

主要来源：肿瘤细胞、巨噬细胞、缺氧组织

 主要功能：

促进血管内皮细胞增殖和迁移

增加血管通透性

参与伤口愈合和胚胎发育

临床意义：

肿瘤血管生成标志物（乳腺癌、结直肠癌等）

缺血性疾病治疗监测（心肌缺血、下肢缺血）

抗VEGF药物治疗效果评估（如贝伐珠单抗）

糖尿病视网膜病变、年龄相关性黄斑变性诊断

2. 检测原理

双抗体夹心ELISA法：

捕获抗体：微孔板包被抗VEGF165特异性单抗（如VEGF165亚型选择性抗体）

样本孵育：VEGF165与固相抗体结合

检测抗体：加入生物素标记的抗VEGF抗体（识别不同表位）

信号放大：链霉亲和素-HRP复合物结合

显色检测：TMB显色，450nm测定OD值

3. 试剂盒组成

组分  规格  保存条件

预包被微孔板  96T（可拆）  2-8℃（干燥）

VEGF165标准品  15.6-1000 pg/mL（7梯度）  -20℃

检测抗体（生物素标记）  1.2mL  -20℃

链霉亲和素-HRP  1.2mL  -20℃（避光）

样本稀释液  20mL  2-8℃

TMB底物  10mL  2-8℃（避光）

终止液（1M H?SO?）  10mL  室温

20×洗涤缓冲液  50mL  室温

4. 样本要求

适用样本：

血清（推荐无抗凝管采集，室温凝固30分钟后离心）

血浆（EDTA抗凝，避免肝素干扰）

细胞培养上清（离心去除细胞碎片）

组织匀浆（推荐含蛋白酶抑制剂的RIPA裂解液）

样本处理：

立即分离血浆/血清（延迟处理会导致血小板释放VEGF）

分装保存于-80℃（避免反复冻融>3次）

检测前室温缓慢融化，避免剧烈震荡

5. 检测流程

标准操作步骤：

标准品复溶：用稀释液配制15.6、31.2、62.5、125、250、500、1000 pg/mL梯度

加样：标准品/样本100μL/孔，37℃孵育2小时

洗涤：自动洗板机洗5次（300μL/孔）

加检测抗体：100μL/孔，37℃孵育1小时

加酶复合物：100μL/孔，37℃孵育30分钟

显色：TMB避光反应15±2分钟

终止：50μL终止液

读值：450nm主波长，630nm参比波长

6. 技术参数

参数  性能指标

检测范围  15.6-1000 pg/mL

灵敏度（LLOQ）  4.7 pg/mL

批内精密度  CV<6%

批间精密度  CV<10%

回收率  92-108%

特异性  仅检测VEGF165，不与VEGF121/VEGF189交叉反应

干扰试验  血红蛋白<5mg/mL、甘油三酯<20mg/mL无干扰

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