小鼠硒蛋白P1(SEPP1)ELISA试剂盒

预期用途

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA），定量检测小鼠血清、血浆或细胞培养上清等生物样本中的硒蛋白P1（SEPP1）含量，适用于科研用途，不用于临床诊断。

实验原理

试剂盒以抗小鼠SEPP1抗体预包被微孔板，形成固相载体。实验时，样本中的SEPP1与包被抗体结合，依次加入生物素化检测抗体、辣根过氧化物酶（HRP）标记的亲和素，形成复合物。洗涤后加入显色底物TMB，在HRP催化下产生蓝色产物，终止液（酸性溶液）作用后转为黄色。通过450 nm波长测定吸光度（OD值），OD值与SEPP1浓度呈正相关，根据标准曲线计算样本浓度。

试剂盒组成

预包被酶标板：96孔（可拆卸条板）

SEPP1标准品：冻干粉2瓶，临用前以样本稀释液复溶至1 mL（浓度梯度需用户自行稀释，建议范围：15.6–1000 pg/mL）。

样本稀释液：1×10 mL

生物素化检测抗体：1×120 μL

HRP-亲和素工作液：1×120 μL

显色底物TMB：A液、B液各6 mL

终止液（1 M H₂SO₄）：1×6 mL

20×浓缩洗涤液：1×25 mL（使用前需蒸馏水稀释）

封板膜、说明书：各1份

需自备器材

酶标仪（450 nm滤光片）

移液器及一次性吸头

37℃恒温孵育箱

蒸馏水及离心管

操作步骤

复温与配液：试剂盒室温平衡30分钟，浓缩洗涤液按1:19稀释备用。

标准品稀释：复溶后梯度稀释至目标浓度（如1000 pg/mL起始，倍比稀释至15.6 pg/mL）。

加样：

标准品孔：50 μL/孔

样本孔：10 μL样本 + 40 μL稀释液（5倍稀释）

空白孔：仅加样本稀释液

孵育与洗涤：37℃孵育60分钟，洗板5次。

显色与终止：依次加入TMB底物（各100 μL/孔），避光反应15分钟，终止液50 μL/孔终止反应。

检测：450 nm波长读取OD值，绘制标准曲线并计算样本浓度。

注意事项

避免反复冻融标准品或样本。

显色时间需严格控制，避免过度反应。

若样本浓度超出检测范围，建议进一步稀释后复测。

储存条件

未开封试剂盒2–8℃保存，有效期12个月；开封后组分需按标签要求存放。

技术参数

检测范围：15.6–1000 pg/mL

灵敏度：<10 pg/mL

批内/批间变异系数：≤10%

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