小鼠红细胞生成素(EPO)ELISA试剂盒

预期用途

本试剂盒采用酶联免疫吸附法（ELISA）定量检测小鼠血清、血浆、细胞裂解液或培养上清等样本中的红细胞生成素（EPO）含量，适用于科研用途，不用于临床诊断。

实验原理

采用双抗体夹心法：

包被抗体：微孔板预包被抗小鼠EPO抗体，形成固相载体。

抗原结合：加入样本或标准品，样本中的EPO与固相抗体结合。

标记抗体结合：加入生物素化抗小鼠EPO抗体，形成“抗体-抗原-标记抗体”复合物。

显色反应：加入HRP标记的亲和素及底物TMB，在过氧化物酶催化下产生蓝色产物，酸化后转为黄色。颜色深度与EPO浓度正相关。

检测：450 nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算浓度。

试剂盒组成

预包被微孔板（48孔或96孔配置）

EPO标准品（冻干粉，复溶后浓度为120 mU/mL，需梯度稀释为60、30、15、7.5、3.75、1.87 mU/mL）

生物素化抗体、HRP标记亲和素

洗涤缓冲液、样品稀释液

TMB显色液、终止液

封板膜、说明书

操作步骤

标准品制备：临用前15分钟内复溶并稀释，避免直接孔内稀释。

加样：依次加入标准品或样本（100 μL/孔），37℃孵育90分钟。

洗涤：弃液后加洗涤缓冲液洗涤3次。

标记抗体孵育：加入生物素化抗体（100 μL/孔），37℃孵育60分钟，再次洗涤。

酶结合物反应：加入HRP标记亲和素（100 μL/孔），37℃避光孵育30分钟，洗涤。

显色：加入TMB（90 μL/孔），避光反应15-30分钟，加终止液（50 μL/孔）终止反应。

检测：450 nm波长读取OD值，绘制标准曲线并计算样本浓度。

注意事项

避免反复冻融标准品或样本。

洗涤需彻底，防止非特异性结合。

显色时间需严格控制，避免过度反应。

技术参数

检测范围：1.87–120 mU/mL

灵敏度：<0.5 mU/mL

特异性：不与小鼠其他细胞因子交叉反应。

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