大鼠酸性糖蛋白(AGP)ELISA试剂盒

商品属性

检测方法：双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）

适用样本：大鼠血清、血浆、细胞培养上清液等

检测原理

试剂盒采用特异性抗大鼠AGP抗体预包被微孔板，加入样本或标准品后，AGP与固相抗体结合；随后加入生物素标记的检测抗体，形成“抗体-抗原-抗体”复合物；再结合辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素，通过TMB显色反应测定吸光度（OD值），其强度与AGP浓度成正比。

试剂盒组成

| 组分 | 规格（96T） | 保存条件 |

| 预包被微孔板 | 8×12孔 | 2-8℃（干燥） |

| AGP标准品 | 6管（0.5mL）| -20℃ |

| 生物素标记检测抗体 | 1瓶（120μL）| -20℃（避光） |

| HRP-链霉亲和素 | 1瓶（120μL）| -20℃（避光） |

| TMB显色液 | 1瓶（10mL） | 4℃（避光） |

| 终止液（2M H₂SO₄） | 1瓶（10mL） | 室温 |

| 洗涤缓冲液（20×） | 1瓶（50mL） | 4℃（稀释后2-8℃）|

样本处理

血清/血浆：采集后离心（3000 rpm, 10 min），避免溶血，-20℃保存。

细胞上清：离心去除沉淀，立即检测或分装冻存。

操作步骤

标准品稀释：用标准品稀释液将冻干标准品梯度稀释（0-2000 ng/mL）。

加样：每孔加入100μL标准品或样本，37℃孵育90分钟。

洗涤：弃液后拍干，加入洗涤液洗涤3次。

加检测抗体：每孔加100μL生物素化抗体，37℃孵育60分钟。

加酶结合物：每孔加100μL HRP-链霉亲和素，37℃避光孵育30分钟。

显色：加入TMB底物90μL，避光反应15-20分钟。

终止：加入50μL终止液，立即测量450 nm OD值。

结果计算

以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线。

根据样本OD值从曲线方程计算AGP浓度。

性能参数

检测范围：15.6-1000 ng/mL

灵敏度：<5 ng/mL

批内变异：CV < 8%

批间变异：CV < 10%

回收率：85%-115%

注意事项

试剂使用前平衡至室温，避免反复冻融。

TMB显色时间需严格控制，避免强光照射。

不同批次试剂不可混用。

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