大鼠软骨寡聚基质蛋白(COMP)ELISA试剂盒

商品属性

预期用途

本试剂盒采用酶联免疫吸附法（ELISA），定量检测大鼠血清、血浆、细胞培养上清液或其他生物液体中的软骨寡聚基质蛋白（COMP）含量，适用于体外研究。

实验原理

双抗体夹心法：

微孔板预包被抗大鼠COMP抗体，形成固相载体。

加入样本或标准品后，COMP与固相抗体结合，再依次加入生物素化抗COMP抗体、辣根过氧化物酶（HRP）标记的亲和素，形成抗体-抗原-酶标复合物。

经洗涤后，加入底物TMB显色，在HRP催化下产生蓝色产物，酸性终止液使其转为黄色。

450 nm波长下测定吸光度（OD值），OD值与COMP浓度呈正相关，通过标准曲线计算样本浓度。

检测范围：

典型检测范围为0.2–8 μg/L。

试剂盒组成

酶标板：96孔（预包被抗体）。

标准品：冻干粉2瓶（80 ng/ml或1000 ng/瓶），需用配套稀释液复溶后梯度稀释（如20 ng/ml、10 ng/ml等）。

生物素化抗体工作液：12 ml。

HRP标记亲和素/酶标抗体：12 ml。

TMB底物溶液：12 ml。

终止液（硫酸溶液）：12 ml。

浓缩洗涤液（20×）：50 ml，需按比例稀释后使用。

样本稀释液：12 ml（用于标准品及样本稀释）。

操作步骤

标准品制备：复溶后梯度稀释至所需浓度（如20–0.312 ng/ml），避免在酶标板中直接稀释。

加样与孵育：

每孔加入样本或标准品100 μl，37℃孵育90分钟。

洗涤后加入生物素化抗体，37℃孵育60分钟。

显色与终止：

加入TMB底物避光显色15–30分钟，终止后30分钟内测定OD值。

注意事项

试剂盒需2–8℃保存，复溶后的标准品需15分钟内使用。

避免反复冻融样本，高浓度样本需用稀释液预稀释。

操作时需佩戴防护用具，终止液具腐蚀性。

结果计算

以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标绘制标准曲线，通过四参数拟合方程计算样本浓度。

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