大鼠穿孔素1(PRF1)elisa试剂盒

一、核心检测参数

检测靶标：大鼠穿孔素1（PRF1，65-70kDa细胞毒性蛋白）

检测原理：夹心ELISA（特异性识别活性PRF1）

动态范围：20-2000 pg/mL（4个数量级）

灵敏度：<5 pg/mL（可检测单个CTL细胞分泌量）

 样本兼容性：

NK细胞/CTL培养上清（推荐）

脾淋巴细胞悬液

肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）提取液

血清/血浆（需超速离心去除颗粒）

二、关键技术突破

抗体对设计：

捕获抗体：抗MACPF结构域单抗（Clone P1-8）

检测抗体：抗C2结构域多抗（生物素标记）

活性检测优势：

特异性识别钙离子结合构象

不识别无活性的PRF1前体

三、实验方案优化

细胞激活方案：

刺激条件 = IL-2(100U/mL) + K562细胞(效靶比10:1)

培养时间 = 48h（分泌高峰期）

样本处理要点：

细胞上清：300×g离心10分钟去除细胞碎片

组织样本：

matlab

裂解缓冲液 = 含1% CHAPS的TBS

离心条件 = 10000×g,30min,4℃

四、质量控制系统

参数  验收标准

批内CV  ≤6%

批间CV  ≤9%

回收率  90-110%

稳定性  24个月@-80℃

五、核心应用领域

肿瘤免疫：

CAR-NK细胞疗效评估

免疫检查点抑制剂作用机制

病毒感染：

CTL抗病毒活性监测

慢性病毒感染免疫逃逸

移植免疫：

移植物抗宿主病（GVHD）预测

移植排斥反应评估

六、关键操作规范

特殊处理要求：

所有步骤需在4℃以下操作（防止PRF1自聚合）

避免反复冻融（≤2次）

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