大鼠白介素17A(IL-17A)elisa试剂盒

                                             大鼠白介素17A(IL-17A)elisa试剂盒
1. 检测原理

采用双抗体夹心ELISA技术，特异性识别大鼠IL-17A（又称CTLA-8）。预包被抗大鼠IL-17A单抗捕获样本中的IL-17A，生物素标记的二抗与HRP-链霉亲和素系统放大信号，TMB显色强度与IL-17A浓度呈正相关。

2. 核心组分

组分  规格  保存  关键特性

预包被板  96T  2-8℃  高亲和力单抗（克隆号：eBio17CK15A5）

重组标准品  0-1000pg/mL  -20℃  冻干粉，含大鼠IL-17A全长蛋白

生物素-抗体  100μL  -20℃  识别IL-17A二聚体

细胞刺激剂  1mL  -20℃  PMA/ionomycin混合液（可选）

阻断缓冲液  15mL  4℃  含5%BSA的PBS

 3. 性能参数

动态范围：7.8-500pg/mL（扩展至1000pg/mL需样本稀释）

灵敏度：2.3pg/mL（基于3倍空白SD）

样本兼容性：

最佳：激活的脾细胞上清

适用：血清（需1:2稀释）、关节滑液、肠系膜淋巴结匀浆

交叉反应：

大鼠IL-17F：<0.5%

小鼠IL-17A：<0.01%

回收率：92-108%（加标实验）

4. 样本处理方案

4.1 细胞上清制备

分离大鼠脾淋巴细胞（密度梯度离心）

用含刺激剂的RPMI1640培养（5×10 cells/mL）

48小时后收集上清，0.22μm过滤

4.2 炎症组织处理

关节炎模型：关节腔冲洗液+蛋白酶抑制剂

结肠炎模型：结肠组织匀浆（1:9 w/v PBS）

4.3 保存条件

短期：4℃保存≤24小时

长期：-80℃分装（避免＞2次冻融）

5. 标准化操作流程

预实验准备

所有试剂平衡至室温（18-25℃）

配制标准品梯度：0、7.8、15.6、31.2、62.5、125、250、500pg/mL

关键步骤控制

孵育条件：37℃湿盒，避免震动

洗板程序：300μL/孔，浸泡30秒×5次

显色时间：室温精确控制10分钟（±30秒）

质量控制

每板设置：空白孔、零标准品、内部质控品

接受标准：质控品CV≤15%

6. 应用场景

自身免疫病研究：EAE（实验性自身免疫性脑脊髓炎）、CIA（胶原诱导性关节炎）

黏膜免疫：肠道Th17细胞应答

感染模型：金黄色葡萄球菌感染中的IL-17动态

药物筛选：IL-17A抑制剂药效评估

7. 注意事项

实验设计

推荐采样时间点：免疫后7-14天

阳性对照：ConA刺激的脾细胞上清

干扰控制

高IgG样本需Protein G预处理

数据分析

推荐曲线拟合：四参数逻辑（4PL）模型

异常值标准：超出标准曲线±20%

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