U251 MG/TMZ人类星形胶质瘤耐替莫唑胺细胞

U251 MG/TMZ人类星形胶质瘤耐替莫唑胺细胞

 细胞介绍

1） 来源：胶质瘤

2） 形态：贴壁细胞

3） 含量：>1x10^6  细胞数

4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5)  用途：仅供科研使用

关键特征：

亲本细胞：U251 MG（人胶质母细胞瘤细胞系）

耐药诱导方法：梯度浓度TMZ处理（初始50μM，逐步递增至300μM）

耐药指数：IC50可达亲本细胞的5-10倍（约500-1000μM vs 50-100μM）

分子特征：

MGMT高表达（启动子非甲基化）

DNA错配修复（MMR）系统缺陷（如MSH6下调）

干细胞特性增强（CD133+比例升高）

培养条件与特性

培养体系：

参数  推荐条件

基础培养基  DMEM高糖 + 10% FBS

耐药维持  含100μM TMZ（每月撤药验证稳定性）

培养环境  37°C，5% CO

传代方法  0.25%胰蛋白酶-EDTA消化（3分钟）

冻存条件  90% FBS + 10% DMSO

耐药性验证指标：

细胞活力：CCK-8法检测TMZ梯度浓度（0-1000μM）的剂量反应曲线

克隆形成：2μM TMZ处理下仍能形成>50%克隆（亲本细胞<10%）

分子标志：

Western检测MGMT蛋白表达

qPCR检测MSH6/MLH1 mRNA水平

实验应用

研究领域：

耐药机制：

MGMT依赖性与非MGMT机制（如BER通路激活）

肿瘤干细胞（GSCs）在耐药中的作用

逆转耐药策略：

MGMT抑制剂（如O6-BG）联用效果

PARP抑制剂（如Olaparib）的增敏作用

代谢重编程：

糖酵解与氧化磷酸化平衡变化（Seahorse分析）

 注意事项：

污染防控：细菌污染：培养液浑浊、变黄，需添加抗生素（如青霉素-链霉素），污染严重时丢弃。

霉菌污染：显微镜下可见丝状/絮状漂浮物，需彻底消毒培养箱（过氧乙酸擦拭+紫外线照射），污染细胞立即丢弃。

支原体污染：无明显外观变化，需定期用PCR或荧光法检测，污染后可用支原体清除试剂处理。

操作规范：收到细胞后，先检查包装完整性及干冰状态，镜检细胞形态并拍照记录（40x、100x、200x）。

未开封细胞若污染或活性差（3天内反馈），可申请重发；客户操作失误导致问题不重发。

运输与保存：干冰运输：冻存管含1×10⁶ cells，收到后立即转入液氮或-80℃冰箱。

常温运输：T25培养瓶，收到后静置3-4小时稳定状态，再换液或传代。

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