人类星形胶质瘤耐替莫唑胺细胞+LUC；U251MG/TMZ+LUC

产品信息：

人类星形胶质瘤耐替莫唑胺细胞+LUC；U251MG/TMZ+LUC是一种稳定表达荧光素酶（Luciferase）的耐药性胶质瘤细胞系，具有贴壁生长的上皮细胞样形态，常用于胶质瘤耐药机制研究及体内成像实验。以下是其详细说明、培养操作和特性：

细胞特性

来源背景：U251MG/TMZ+LUC细胞系由人星形胶质瘤细胞U251衍生而来，通过逐步暴露于递增浓度的替莫唑胺（TMZ）诱导耐药性，并通过慢病毒转染技术稳定表达荧光素酶（Luciferase），用于生物发光成像研究。该细胞系对TMZ具有显著耐药性，适用于研究胶质瘤耐药机制及评估抗肿瘤药物疗效。

形态与生长：呈上皮细胞样形态，贴壁生长。生物安全等级为1级。

分子特征：表达胶质瘤相关标志物，如GFAP（胶质纤维酸性蛋白），并具有对TMZ的耐药性。

培养操作

培养基与条件

培养基：推荐使用DMEM培养基，添加10%胎牛血清（FBS）和1%双抗（青霉素/链霉素）。

培养环境：37°C、5% CO、饱和湿度环境。

传代比例：1:2至1:4，每2-3天换液一次。

收到细胞处理

常温运输：用75%酒精消毒瓶壁，置于37°C培养箱静置2-4小时稳定状态。镜下观察细胞密度，未超过80%汇合度时收集原培养基加6ml新鲜培养基继续培养；超过80%可直接传代。

干冰运输：需立即转入液氮或-80°C冰箱短期冻存，或直接复苏。

复苏与传代

复苏步骤：从液氮中取出冻存管，快速置于37°C水浴中解冻，将细胞悬液转移至含新鲜培养基的离心管中，1000 RPM离心5分钟，弃上清后重悬细胞并接种培养瓶，置于培养箱中培养过夜。

传代方法：当细胞密度达80%-90%时进行传代。弃去旧培养基，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。加入0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液消化1-2分钟，显微镜下观察细胞变圆后终止消化，轻轻吹打收集细胞，离心后用新鲜培养基重悬，按1:2至1:4比例分瓶传代。

冻存

冻存液：90%胎牛血清（FBS）+10%DMSO。

冻存步骤：收集细胞，离心后弃上清，用冻存液重悬细胞，调整细胞密度至1×10?细胞/mL，分装至冻存管中，逐步降温后存于液氮或-80°C冰箱。

研究应用

耐药机制研究：U251MG/TMZ+LUC细胞系对TMZ具有显著耐药性，适用于研究胶质瘤耐药机制及评估抗肿瘤药物疗效。

肿瘤生长与转移研究：由于稳定表达荧光素酶，可在活体动物模型中通过生物发光成像技术实时监测肿瘤的生长和转移情况。

药物筛选与疗效评估：用于筛选和评估针对胶质瘤的新型药物，研究药物对肿瘤生长抑制的效果。

注意事项

污染防控：严格无菌操作，定期检测支原体、细菌、真菌污染。

细胞状态观察：定期在显微镜下观察细胞形态和生长状态，确保细胞健康。

荧光素酶活性维持：若实验要求维持荧光强度，可加入嘌呤霉素进行筛选，避免荧光素酶表达丢失。

培养操作要点：

基础培养基选择：分为天然培养基、合成培养基（如DMEM、RPMI 1640）和无血清培养基45。目前以合成培养基和无血清培养基使用居多。

培养条件设置：

温度：多数人和哺乳动物细胞为36-37℃，昆虫细胞为27℃。

pH值：多数哺乳动物细胞为7.4，昆虫细胞为6.2。

CO₂浓度：通常维持5-7% CO₂，多数细胞适合5% CO₂气氛。

渗透压：控制在260-320mOsm/kg为宜。

功能特点

通过被动运输和主动运输实现物质跨膜转运；以ATP为核心载体，通过线粒体氧化磷酸化或叶绿体光合磷酸化途径供能；通过受体-第二信使-效应器的级联反应模式进行信号转导；原核细胞采用二分裂，真核细胞则通过有丝分裂、减数分裂等方式繁殖；细胞可进行程序性死亡（凋亡），并在多细胞生物中实现分化形成不同组织

注意事项与应用

无菌操作：必须严格无菌无毒，避免微生物污染和不同细胞间交叉污染。

营养需求：需提供氨基酸、维生素、无机盐、促生长因子等，动物细胞还需血清。

抗生素使用：可添加双抗或三抗预防污染，但长期培养不建议持续使用，以防产生耐药性。

细胞培养技术是生物医学研究的基础工具，可用于细胞生理代谢、药物筛选、疫苗生产等研究。不同细胞系的具体培养条件需参考相关文献或实验经验调整。

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