LOVO+LUC人结直肠癌细胞荧光素酶标记

细胞属性：

细胞特性：

该细胞通过慢病毒转染的方式携带Luc基因。

1） 来源：结直肠腺癌

2） 形态：上皮细胞样，贴壁生长

3） 含量：>1x10^6  细胞数

4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5)  用途：仅供科研使用。

1. 实验流程概述

1.1 选择荧光素酶基因

常用荧光素酶类型：

萤火虫荧光素酶（Firefly Luciferase, FLuc）：底物为D-荧光素，发射波长~560 nm，适合高灵敏度检测。

海肾荧光素酶（Renilla Luciferase, RLuc）：底物为腔肠素，可与FLuc双标记区分不同细胞群。

1.2 构建表达载体

载体类型：慢病毒（Lentivirus）、逆转录病毒（Retrovirus）或质粒（需转染效率高）。

常用启动子：CMV（强启动子）或EF1α（稳定表达）。

标签融合：可加嘌呤霉素（Puromycin）或新霉素（Neomycin）抗性基因用于筛选。

1.3 转染/感染细胞

慢病毒转导（推荐）：

包装慢病毒（含Luc基因）。

感染LOVO/LUC细胞（MOI需预实验确定）。

加入聚凝胺（Polybrene）增强感染效率（终浓度4-8 μg/mL）。

电转/脂质体转染：适合瞬时表达，但稳定转染需药物筛选。

1.4 筛选稳定细胞系

药物筛选（如嘌呤霉素，通常1-10 μg/mL，持续7-14天）。

单克隆化：通过有限稀释法挑选高表达克隆。

1.5 验证标记效果

体外检测：加入底物（如D-荧光素，150 μg/mL），用化学发光仪检测信号强度。

体内验证：将细胞移植至小鼠（皮下/原位），注射底物后观察生物发光信号（IVIS成像系统）。

2. 关键注意事项

细胞状态：确保LOVO/LUC细胞传代稳定，感染前24小时铺板至50%-70%密度。

荧光素酶活性优化：

避免反复冻融细胞（酶活性可能下降）。

体内实验时，D-荧光素注射剂量通常为100-150 mg/kg（腹腔注射），10-15分钟后成像。

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