人结直肠癌细胞+LUC；LOVO+LUC

                                                           人结直肠癌细胞+LUC；LOVO+LUC
产品信息：

人结直肠癌细胞LOVO+LUC是一种稳定表达荧光素酶（Luciferase, Luc）的细胞系，源自人结直肠癌组织，具有上皮细胞样形态和贴壁生长特性，广泛应用于肿瘤研究，尤其是在肿瘤生长、转移及药物筛选的体内成像研究中。以下是其详细说明、培养操作和特性：

细胞特性

来源与背景：LOVO细胞最初从一名56岁白人男性结肠腺癌患者的左锁骨上区转移瘤中分离建立。LOVO+LUC是通过慢病毒转染技术使其稳定表达荧光素酶（Luciferase, Luc）的衍生成细胞，用于生物发光成像研究。

形态特性：细胞呈上皮细胞样形态，贴壁生长。

生长特性：LOVO+LUC细胞具有较高的增殖能力，适合用于体外和体内实验研究。

分子特征：表达结直肠癌相关标志物，如CEA（癌胚抗原），并具有成瘤性，可在裸鼠中成瘤。

2. 培养操作

2.1. 培养基与条件

培养基：推荐使用Ham's F-12K培养基，添加10%胎牛血清（FBS）和1%双抗（青霉素/链霉素）。

培养环境：37°C、5% CO、饱和湿度环境。

2.2. 复苏与传代

复苏步骤：从液氮中取出冻存管，快速置于37°C水浴中解冻，将细胞悬液转移至含新鲜培养基的离心管中，1000 RPM离心5分钟，弃上清后重悬细胞并接种培养瓶，置于培养箱中培养过夜。

传代方法：当细胞密度达80%-90%时进行传代。弃去旧培养基，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。加入0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液消化1-2分钟，显微镜下观察细胞变圆后终止消化，轻轻吹打收集细胞，离心后用新鲜培养基重悬，按1:2至1:4比例分瓶传代。

2.3. 冻存

冻存液：90%胎牛血清（FBS）+10%DMSO。

冻存步骤：收集细胞，离心后弃上清，用冻存液重悬细胞，调整细胞密度至1×10?细胞/mL，分装至冻存管中，逐步降温后存于液氮或-80°C冰箱。

3. 研究应用

肿瘤生长与转移研究：LOVO+LUC细胞由于表达荧光素酶，可在活体动物模型中通过生物发光成像技术实时监测肿瘤的生长和转移情况。

药物筛选与疗效评估：用于筛选和评估针对结直肠癌的新型药物，研究药物对肿瘤生长抑制的效果。

基因表达研究：通过荧光素酶报告基因系统，研究特定基因或信号通路在结直肠癌发生发展中的作用。

4. 注意事项

污染防控：严格无菌操作，定期检测支原体、细菌、真菌污染。

细胞状态观察：定期在显微镜下观察细胞形态和生长状态，确保细胞健康。

荧光素酶活性维持：若实验要求维持荧光强度，可加入嘌呤霉素进行筛选，避免荧光素酶表达丢失。

基本操作步骤：

原代培养：取材→分离→培养，需保持材料新鲜及严格无菌2。

传代培养：贴壁细胞需胰酶消化，悬浮细胞可直接传代，离心后重悬分瓶23。

冻存与复苏：使用含10%DMSO的冻存液，程序降温后液氮保存；复苏时快速37℃水浴解冻。

培养操作要点：

基础培养基选择：分为天然培养基、合成培养基（如DMEM、RPMI 1640）和无血清培养基45。目前以合成培养基和无血清培养基使用居多。

培养条件设置：

温度：多数人和哺乳动物细胞为36-37℃，昆虫细胞为27℃。

pH值：多数哺乳动物细胞为7.4，昆虫细胞为6.2。

CO₂浓度：通常维持5-7% CO₂，多数细胞适合5% CO₂气氛。

渗透压：控制在260-320mOsm/kg为宜。

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具体特点如下：

环境与营养：需无菌环境、精确的温度（36-37℃）和pH（7.2-7.4），动物细胞常需血清，植物细胞需激素。

生长方式：贴壁细胞需表面附着，悬浮细胞自由漂浮，半贴壁半悬浮兼具两者特性。

传代与密度：贴壁细胞需胰酶消化传代，悬浮细胞直接分瓶；密度达80%-90%时需传代，避免营养枯竭与代谢抑制。

敏感性：对剪切应力、污染、温度变化敏感，需定期更换培养液清除代谢物。

应用与局限：便于活细胞观察与实验控制，但体外环境与体内存在差异，长期传代可能导致遗传不稳定与去分化。