hacat人永生化表皮细胞

hacat人永生化表皮细胞

 细胞特性:

该细胞源自一位62岁患有黑色素瘤男性的病灶外围正常皮肤，角蛋白、角化细胞交联外膜蛋白、中间丝相关蛋白阳性。

细胞特性

1） 来源：正常表皮组织

2） 形态：上皮细胞样，贴壁生长

3） 含量：>1x10^6  细胞数

4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5)  用途：仅供科研使用。

1细胞背景与特性

来源：

1988年由德国科学家Boukamp等从成人皮肤表皮永生化获得，属自发永生化细胞系（非病毒转导），保留正常角质形成细胞分化潜能。

分子特征：

永生化机制：端粒酶活性上调p53/Rb通路异常（但无致瘤性）。

标志物表达：

阳性：角蛋白K5/K14（基底层）、K1/K10（分化层，诱导后表达）；

阴性：侵袭性标记物（如MMP-9基础水平低）。

2科研核心应用

（1）皮肤生物学研究

屏障功能：

研究紧密连接蛋白（Claudin-1）与皮肤渗透性关系。

炎症模型：

UVB或TNF-α诱导IL-6/IL-8释放，模拟皮炎反应。

（2）转化医学

化妆品/药物测试：

OECD认证的皮肤刺激性替代试验（如EDirectiv2010/63）。

伤口愈合：

划痕实验模拟再上皮化过程（需钙离子诱导分化）。

3培养标准操作

参数  条件  注意事项

培养基  DMEM高10FB1NEAA  避免使用抗生素（影响分化评估）

传代  0.05%胰酶+0.02EDTA，1:5分割  汇合度＞80%易自发分化

分化诱导  高钙（1.8mCa2）或气液界面培养  需3-7天形成复层结构

 注意事项：

污染防控：细菌污染：培养液浑浊、变黄，需添加抗生素（如青霉素-链霉素），污染严重时丢弃。

霉菌污染：显微镜下可见丝状/絮状漂浮物，需彻底消毒培养箱（过氧乙酸擦拭+紫外线照射），污染细胞立即丢弃。

支原体污染：无明显外观变化，需定期用PCR或荧光法检测，污染后可用支原体清除试剂处理。

操作规范：收到细胞后，先检查包装完整性及干冰状态，镜检细胞形态并拍照记录（40x、100x、200x）。

未开封细胞若污染或活性差（3天内反馈），可申请重发；客户操作失误导致问题不重发。

运输与保存：干冰运输：冻存管含1×10⁶ cells，收到后立即转入液氮或-80℃冰箱。

常温运输：T25培养瓶，收到后静置3-4小时稳定状态，再换液或传代。

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