293T人胚肾细胞

293T人胚肾细胞

  细胞特性:

1） 来源：人胚胎肾脏

2） 形态：上皮细胞样，贴壁生长，贴壁能力较弱

3） 含量：>1x10^6  细胞数

4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5） 用途：仅供科研使用。

1起源与背景

母系来源：源自1977年由FranGraham团队通过人胚胎肾细胞（HEK293）改造获得。

改造过程：通过转染腺病毒5型（Ad5）的DNA片段（包含E1A/E1B基因）使细胞永生化。

T的含义：表达SV40病毒的大T抗原（温度敏感型突变体tsA1609），允许在许可温度（33°C）下进行SV40复制子载体的高效复制。

2关键特性

易转染性：对钙磷酸盐、脂质体等转染方法敏感，转染效率高达50-90%。

快速增殖：倍增时间约24-36小时，适合大规模蛋白生产。

悬浮适应性：可通过驯化在无血清悬浮培养中生长，用于生物制药。

3科研应用

病毒包装：

慢病毒：需搭配psPAX2和pMD2.G三质粒系统

逆转录病毒：常用pCL-Ampho包装系统

AAV生产：需补充Rep/Cap基因

蛋白表达：

瞬时表达可达1-5mg/L（如IgG抗体）

适合带信号肽的分泌蛋白表达

CRISPR研究：常用作基因编辑效率验证的对照细胞

4培养要点

基础培养基：DMEM（高糖）+10FB+1GlutaMAX

传代比例：建议1:4至1:6，避免过度稀释（<1:10）

支原体检测：推荐每月用PCR法（如引物针对16rRNA）检测

冻存方案：90FBS+10DMSO，液氮保存密度5×10^6/mL

 注意事项：

污染防控：细菌污染：培养液浑浊、变黄，需添加抗生素（如青霉素-链霉素），污染严重时丢弃。

霉菌污染：显微镜下可见丝状/絮状漂浮物，需彻底消毒培养箱（过氧乙酸擦拭+紫外线照射），污染细胞立即丢弃。

支原体污染：无明显外观变化，需定期用PCR或荧光法检测，污染后可用支原体清除试剂处理。

操作规范：收到细胞后，先检查包装完整性及干冰状态，镜检细胞形态并拍照记录（40x、100x、200x）。

未开封细胞若污染或活性差（3天内反馈），可申请重发；客户操作失误导致问题不重发。

运输与保存：干冰运输：冻存管含1×10⁶ cells，收到后立即转入液氮或-80℃冰箱。

常温运输：T25培养瓶，收到后静置3-4小时稳定状态，再换液或传代。

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