氨基比林-N-去甲基化酶(AND)测定试剂盒/分光光度法/24样

氨基比林-N-去甲基化酶(AND)测定试剂盒/分光光度法/24样

测定意义：

细胞色素 P450 酶是一组在外源物质代谢中，尤其是药物和毒物，具有重要作用的酶系。AND作为 P450 酶系的重要一员，相当于 CYP3A4 亚型，与药物的去甲基化反应密切相关。

测定原理：

AND 催化氨基比林释放甲醛，通过 Nash 比色法测定甲醛含量，即可计算出 AND 活性。

自备仪器和用品：

可见分光光度计、普通离心机，超速离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL 玻璃比色皿、蒸馏水、无水乙醇和冰。

AND 活性测定操作：
1.  分光光度计预热 30 min ，调节波长到 412 nm，蒸馏水调零。

2. 试剂二置于 37℃水浴中预热 30min。

3.  对照管：取 1 支 EP 管，加入 50μL 粗酶液，850μL 试剂二，50μL 试剂三，50μL 蒸馏水，混匀后置于37℃水浴保温30min；立即加入 175μL 试剂五，混匀后置于冰浴中 5min；取出后加入 175μL 试剂六，混匀后室温静置 5min；室温 8000rpm 离心 5min；取新的 EP 管，加入 500μL 上清液，500μL 试剂七，混匀后水浴 10min，然后取出，用冷水冷却 5min ，于 412nm 测定光吸收，记为 A 对照管。

4. 测定管：取 1 支 EP 管，加入 50μL 粗酶液，850μL 试剂二，50μL 试剂三，50μL 试剂四，混匀后置于37℃水浴保温30min；立即加入 175μL 试剂五，混匀后置于冰浴中 5min；取出后加入 175μL 试剂六，混匀后室温静置 5min；室温 8000rpm 离心 5min；取 1 支新 EP 管，加入 500μL 上清液，500μL 试剂七，混匀后60℃水浴 10min，然后取出，用冷水冷却 5min ，于 412nm 测定光吸收，记为 A 测定管。

5.   标准管：取 1 支 EP 管，加入 500μL 标准品，500μL 试剂七，混匀后 60℃水浴 10min，然后取出，用冷水冷却 5min ，于 412nm 测定光吸收，记为 A 标准管。

注 意：

正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。