兔C反应蛋白(CRP)ELISA试剂盒

产品概述

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）定量检测兔血清、血浆或组织匀浆等样本中的C反应蛋白（CRP）浓度。通过特异性抗体结合反应，结合酶催化显色，实现高灵敏度、高特异性的检测。

检测原理

包被抗体：微孔板预包被抗兔CRP单克隆抗体。

样本孵育：加入待测样本或标准品，CRP与包被抗体结合。

标记抗体结合：加入生物素标记的抗兔CRP二抗，形成“抗体-抗原-标记抗体”复合物。

显色反应：加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素及底物TMB，催化生成蓝色产物，终止后转为黄色。

定量分析：450 nm波长下测定吸光度（OD值），标准曲线计算样本浓度。

试剂盒组分（2-8℃保存）

预包被微孔板：96孔（可拆分为48孔使用）

CRP标准品（冻干粉或即用型）：浓度梯度为0、10、50、100、200、500 pg/mL

样本稀释液：1× PBS缓冲液（含蛋白稳定剂）

生物素标记抗体、HRP标记链霉亲和素、TMB底物液、终止液

洗涤缓冲液（20×浓缩液，需稀释）

样本要求

血清/血浆：采集后离心（3000 rpm, 10分钟），-20℃可保存1个月，-70℃长期保存（避免反复冻融）。

组织匀浆：按重量体积比1:9加入PBS匀浆，离心后取上清。

细胞上清液：离心去除沉淀后检测。

操作步骤

标准品稀释：按说明书梯度稀释。

加样：每孔加入样本或标准品100 μL，37℃孵育90分钟。

洗涤：手工或自动洗板机清洗5次（每次浸泡1分钟）。

加标记抗体：每孔加入生物素标记抗体50 μL，37℃孵育60分钟。

加酶结合物：每孔加入HRP标记链霉亲和素100 μL，37℃避光孵育30分钟。

显色与终止：加入TMB底物，避光反应15分钟，终止后30分钟内读数。

注意事项

试剂使用前需平衡至室温，避免反复冻融标准品。

洗板时需彻底去除残留液体，避免交叉污染。

显色时间需严格控制，终止后颜色稳定性约30分钟。

性能参数

灵敏度：≤5 pg/mL

检测范围：10–500 pg/mL

批内变异系数：<10%

批间变异系数：<15%

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