L Wnt-3A小鼠皮下结缔组织细胞

L Wnt-3A小鼠皮下结缔组织细胞

 基本特性:

L Wnt-3A细胞是由L-M(TK-)细胞用Wnt-3A表达载体转染并在含G418的培养基中筛选出的稳转株。Wnt-3A基因编码一个有变异的信号功效分泌性糖蛋白，Wnt基因控制胚胎发过程中的许多模式形成和生长事件。

L Wnt-3A细胞分泌有生物活性的Wnt-3A蛋白，L Wnt-3A细胞是目前生产Wnt-3A条件培养基的最好来源。由于这种条件培养基还包含Wnt-3A蛋白外的其他因子，对于涉及Wnt-3A条件培养基的实验有必要用其来源细胞株作对照。

1细胞来源与背景

起源：

母系细cell源C3H/An小的皮下结缔组织（成纤维细胞样细胞）。

L-Wnt-3是通过转Wnt-3基因（小Wnt3cDNA）获得的稳定表达细胞系。

Wnt-3的作用：

Wnt-3是一种分泌型糖蛋白，可激经典Wnt/β-catenin信号通路，促进细胞增殖、干细胞自我更新和分化调控。

该细胞系常用制备Wnt-3A条件培养基（Wnt3a-CM），用于培养胚胎干细胞（ESCs）、肠道类器官等。

2生物学特性

（1）细胞形态

贴壁生长，呈梭形或星形（典型成纤维细胞样形态）。

分泌特性：持续分活性Wnt-3A蛋至培养基中。

（2）分子标志物

Wnt-3高表达（可通过Westerblot或ELISA检测）。

Wnt通路下游靶基因（如β-catenin、Axin2）可能被激活。

（3）功能特性

支持干细胞培养：其条件培养基（Wnt3a-CM）可替代重组Wnt-3A蛋白，维持胚胎干细胞或肠道干细胞的干性。

肿瘤相关研究：Wnt信号异常激活与结直肠癌等肿瘤相关，该细胞可用于机制研究。

3研究应用

Wnt信号通路研究

分析Wnt/β-catenin通路的激活或抑制机制。

研究Wnt3A对细胞增殖、分化的影响。

干细胞培养

制Wnt3a条件培养基（用于ESCs、肠道类器官、肝祖细胞等）。

癌症研究

探索Wnt信号在结直肠癌、乳腺癌等肿瘤中的作用。

药物筛选

测试Wnt抑制剂（如XAV939、IWP-2）或激动剂的效果。

4培养条件

（1）基础培养基

DMEM（高糖10胎牛血清（FBS1青霉素/链霉素。

特殊需求：如需增强Wnt-3A分泌，可降低血清浓度（如5FBS）。

（2）培养条件

温度：37°C，5CO。

传代方法：

PBS洗涤后，0.05胰蛋白酶-EDT消化1-2分钟。

加入含血清培养基终止消化，离心（100rpmmin）后重悬。

按1:3~1:5比例传代，2-3天换液一次。

（3）Wnt3a条件培养基（Wnt3a-CM）制备

培养L-Wnt-3A细胞至70%融合。

更换为低血清培养基（如DME0.5FBS）。

培养48-72小时后收集上清，离心（200rpm1min）去除细胞碎片。

过滤除菌（0.2μm滤膜），-80°C保存备用（可稳定数月）。

公司出售的产品：

 注意事项：

污染防控：细菌污染：培养液浑浊、变黄，需添加抗生素（如青霉素-链霉素），污染严重时丢弃。

霉菌污染：显微镜下可见丝状/絮状漂浮物，需彻底消毒培养箱（过氧乙酸擦拭+紫外线照射），污染细胞立即丢弃。

支原体污染：无明显外观变化，需定期用PCR或荧光法检测，污染后可用支原体清除试剂处理。

操作规范：收到细胞后，先检查包装完整性及干冰状态，镜检细胞形态并拍照记录（40x、100x、200x）。

未开封细胞若污染或活性差（3天内反馈），可申请重发；客户操作失误导致问题不重发。

运输与保存：干冰运输：冻存管含1×10⁶ cells，收到后立即转入液氮或-80℃冰箱。

常温运输：T25培养瓶，收到后静置3-4小时稳定状态，再换液或传代。