葡萄糖-6-磷酸测定试剂盒(WST-8法) | Glucose-6-phosphate | G6P | EnkiLife恩玑生命

产品简介

G6P是葡萄糖的第6位碳上的羟基在己糖激酶催化下发生磷酸化后生成的分子，是细胞中常见的糖代谢小分子，参与糖酵解(glycolytic pathway)和磷酸戊糖途径(pentose phosphate pathway，PPP)等生化途径。在糖酵解的第一步反应中，葡萄糖被己糖激酶催化生成葡萄糖-6-磷酸，然后通过磷酸葡萄糖异构酶的催化形成果糖-6-磷酸，以继续糖酵解的其它步骤；而在戊糖磷酸途径中，葡萄糖-6-磷酸是其第一个底物，该过程也是生成NADPH的主要途径。除了这两个代谢途径外，葡萄糖-6-磷酸也能转化形成糖原或淀粉而被存储起来。

产品特点

★ WST-8是MTT的一种升级替代产品，和MTT或其他MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点。首先，MTT被一些脱氢酶还原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶解液来溶解；而WST-8和XTT、MTS产生的formazan都是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤。其次，WST-8产生的formazan比XTT和MTS产生的formazan更易溶解。再次，WST-8比XTT和MTS更加稳定，使实验结果更加稳定。

★ WST-8和MTT、XTT等相比，线性范围更宽，灵敏度更高。

★ WST-8和WST-1相比，检测灵敏度更高，更易溶解，并且更加稳定。

★ 本试剂盒使用便捷，灵敏度高，线性范围宽。可以检测含量低至20μM(1nmol)的G6P，在20μM(1nmol)至500μM(25nmol)之间呈现良好的线性关系。使用细胞、组织等的裂解液即可进行检测，无需分离纯化细胞、组织或其它样品中的G6P。

检测原理     

G6P在G6PDH的作用下氧化生成6-PG，在这一反应过程中NADP⁺被还原为NADPH，生成的NADPH在电子耦合试剂1-mPMS(1-Methoxy-5-methylphenaziniumMethylSulfate)的作用下将WST-8还原生成橙黄色的formazan，在450nm左右有最大吸收峰。反应体系中生成的formazan与样品中G6PDH的活性呈正比关系。WST-8法检测G6P的原理参考下图：

产品组分

保存条件

未拆封的试剂盒可在 -20℃保存12个月。

注意事项

1.  经检测本试剂盒中的酶混合液室温存放72小时或反复冻融5次不影响其酶活性。

2. 由于G6P提取液略显粘稠，以该提取液作为稀释液时，无论对标准品还是样品进行稀释，在稀释过程中务必确保稀释均匀，否则易造成实验数据产生较大波动。

3. 在样品加样和混匀过程中，须尽量避免产生气泡，以免影响最终的吸光度测定。

4. 如果不能非常严格地控制反应温度和反应时间，每次检测都需要设置标准曲线。

5. 如果样品溶液中G6P浓度过高或过低，不在试剂盒的线性检测范围内时，可适当调整样品或者提取液的用量。

6. 尽量使用新鲜样品进行检测，冻存或反复冻融的细胞或组织样品可能对结果有一定影响。

 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。