L Wnt3A 小鼠成纤维细胞

L Wnt3A 小鼠成纤维细胞

 基本特性:

种属来源:小鼠

性别年龄:雌性

组织来源:皮下结缔组织

生长特性:贴壁生长

细胞形态:成纤维细胞

细胞规格:1 X 106cells/T25或1 mL冻存管

培养条件:DMEM + 10% fetal bovine serum37 ℃, 5% CO2

冻存条件:90% FBS + 10% DMSO

传代方法:1:3传代, 2-3天传1代

背景与起源

L-Wnt3A 是由 L细胞（小鼠成纤维细胞系L929） 经基因改造后稳定表达 Wnt3A 蛋白的细胞系。

Wnt3A 是一种经典Wnt信号通路激活剂，可促进干细胞自我更新、细胞增殖和分化调控。

该细胞系主要用于：

分泌 活性Wnt3A蛋白（用于条件培养基，支持干细胞培养）。

研究 Wnt/β-catenin信号通路 在发育、癌症和再生医学中的作用。

关键特性

特性  说明

来源  L929小鼠成纤维细胞（经Wnt3A基因转染）

表达蛋白  组成型分泌 Wnt3A（需通过条件培养基收集）

形态  贴壁生长，成纤维细胞样

主要应用  干细胞培养（如胚胎干细胞、肠道类器官）、Wnt信号研究

诱导分化  可用于模拟Wnt依赖性肿瘤（如结直肠癌）

培养条件

基础培养基：DMEM（高糖） + 10% FBS + 1% 青霉素/链霉素。

选择性抗生素（如需维持质粒）：

通常使用 Geneticin（G418, 400-800 μg/mL） 筛选。

培养环境：37°C、5% CO，每2-3天传代一次。

Wnt3A条件培养基制备

待细胞生长至 70-80% 汇合时，换成无血清培养基（如DMEM + 0.5% BSA）。

培养 48-72小时，收集上清液（含分泌的Wnt3A）。

离心（1000 rpm, 5 min）去除细胞碎片，过滤（0.22 μm）后分装，-80°C保存。

使用前 需测试活性（如TopFlash荧光素酶报告基因实验）。

实验应用

干细胞培养

Wnt3A条件培养基可替代重组蛋白，维持 胚胎干细胞（ESCs） 和 肠道类器官 的未分化状态。

Wnt信号通路研究

用于检测 β-catenin核转位、靶基因（如Cyclin D1、Axin2）表达。

癌症模型

研究Wnt依赖性肿瘤（如结直肠癌、肝癌）的增殖与侵袭机制。

药物筛选

测试Wnt抑制剂（如IWR-1、XAV939）对信号通路的调控作用。

公司出售的产品：

 注意事项：

污染防控：细菌污染：培养液浑浊、变黄，需添加抗生素（如青霉素-链霉素），污染严重时丢弃。

霉菌污染：显微镜下可见丝状/絮状漂浮物，需彻底消毒培养箱（过氧乙酸擦拭+紫外线照射），污染细胞立即丢弃。

支原体污染：无明显外观变化，需定期用PCR或荧光法检测，污染后可用支原体清除试剂处理。

操作规范：收到细胞后，先检查包装完整性及干冰状态，镜检细胞形态并拍照记录（40x、100x、200x）。

未开封细胞若污染或活性差（3天内反馈），可申请重发；客户操作失误导致问题不重发。

运输与保存：干冰运输：冻存管含1×10⁶ cells，收到后立即转入液氮或-80℃冰箱。

常温运输：T25培养瓶，收到后静置3-4小时稳定状态，再换液或传代。